Герпес и туберкулез кожи

Human herpesvirus type 8 in tuberculosis patients with effusion
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4628379/

Многие пациенты с туберкулезом (ТБ) являются серопозитивными для вируса герпеса типа 8 человека (HHV-8), и многие пациенты с первичной эффузионной лимфомой имеют высокий уровень ДНК HHV-8 в их выпотах. Однако статус HHV-8 в выпотах пациентов с ТБ остается неясным.

Образцы крови были собраны у 129 пациентов с туберкулезом легких и 129 здоровых людей, контролируемых по возрасту и полу. Сорок пациентов с ТБ имели плевральные или перитонеальные выделения, и 38 из них были доступны. Образцы крови и эффузы анализировали на количество лимфоцитов и моноцитов и / или антитела к HHV-8 и ДНК.

Больные ТБ с или без выпот имели значительно большую серопозитивность HHV-8 (p = 0,009) и титры антител HHV-8 (p = 0,005), чем здоровые контрольные. Серопозитивность и титры крови антител к HHV-8 были одинаковыми у больных туберкулезом с и без выпот. Среди больных туберкулезом с выпотом аналогичные проценты имели сероположительную плазму и сероположительные выпоты. Образцы плазмы пациентов с 6 ТБ, но ни один из здоровых контролей, не были положительными для ДНК HHV-8 (p = 0,03). Больные туберкулезом с или без выпот имели более низкие показатели лимфоцитов крови и более высокие количества моноцитов крови, чем здоровые контрольные группы (p

У HHV-8 была аналогичная серопревалентность у больных туберкулезом с и без выпот. Однако у больных туберкулезом с излияниями наблюдалось более низкое содержание лимфоцитов в крови, чем у пациентов без выпот.

Предыдущие исследования последовательно идентифицировали ДНК вируса герпеса типа 8 (HHV-8) человека у пациентов со всеми типами саркомы Капоши (KS), и этот вирус считается этиологическим агентом для KS [1, 2]. Здоровые люди с инфекциями HHV-8 обычно не имеют симптомов или признаков заболевания. Тем не менее, инфицированные HHV-8 пациенты с различными иммунологическими аномалиями [3,4], такие как вирусы иммунодефицита человека (ВИЧ), могут развиваться KS.

У ВИЧ-инфицированных пациентов снижается количество циркулирующих CD4 + Т-лимфоцитов. Истощение Т-лимфоцитов вообще и CD4 + клеток, в частности, также встречается у пациентов с туберкулезом (ТБ) [5, 6]. Более того, пациенты с ВИЧ-инфекцией или туберкулезом легких имеют мононуклеарные клетки периферической крови с нарушением продукции интерферона-γ при антигенной стимуляции in vitro, а также аберрантную активацию Т-клеток in vivo [7]. Существует также высокая серопревалентность HHV-8 у ВИЧ-инфицированных или больных туберкулезом легких без КС [8-11]. Первичная эффузионная лимфома (PEL) встречается в основном у ВИЧ-инфицированных пациентов и связана с инфекцией HHV-8 [12]. Уровни ДНК HHV-8 в образцах выпот у пациентов с ПЭЛ значительно выше, чем у образцов крови [13]. Однако присутствие антител HHV-8 и ДНК в плазме и выпоты больных туберкулезом с плевральным или перитонеальным выпотом еще не определено.

Пациенты с активным туберкулезом чаще имеют лимфопению и моноцитоз [7, 14, 15]. Таким образом, мы оценили ассоциации инфекции HHV-8 с лимфопенией и моноцитозом у больных туберкулезом с и без выпот. В частности, мы оценили положительность и титры антител к HHV-8, а также положительность и уровень ДНК HHV-8 в образцах крови и эффузы больных туберкулезом с плевральными или перитонеальными выделениями.

Все пациенты недавно диагностировали туберкулез легких и были обследованы до лечения. ТБ первоначально подозревался на основании клинических особенностей и аномалий на рентгенограммах грудной клетки и подтверждается путем идентификации Mycobacterium tuberculosis из культур мокроты в среде Лёвенштайн-Йенсена. Пациенты с абдоминальной полнотой, лихорадкой и даже одышкой подозревались в наличии перитонеального выпота. Этим пациентам были сданы грудной и / или абдоминальный КТ-экзамены с аспирации перитонеального выпота с помощью эхо-гида. Собранные плевральные и перитонеальные эффузии были изучены для рутинной биохимии, включая полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и культуру микобактерий для выявления ТБ, и измерение аденозиндезаминазы (АДА). Определенный выпот ТБ был отмечен позитивной культурой или результатами ПЦР. Пациенты без культивирования или положительности ПЦР были повторно оценены через 2 месяца после начала лечения против туберкулеза, если они имели преобладание лимфоцитов, высокий уровень сывороточного белка и АДА более 40 мг / мл. Из-за высокой распространенности и необходимости юридического уведомления окончательный диагноз туберкулеза обсуждался и определялся официальным комитетом Центров по контролю за заболеваниями Тайваня на основе клинической информации и результатов лечения. Пациенты с дополнительным сердечным, легким или другими основными заболеваниями были исключены. Протокол исследования был одобрен Институциональным наблюдательным советом буддийской больницы Dalin Tzu Chi (B09602001 и B09703021). Все лица предоставили письменное согласие на участие.

Образцы плазмы были собраны после медицинских осмотров 129 пациентов с туберкулезом легких и 129 здоровых людей, контролируемых по возрасту и полу. Сорок пациентов с ТБ имели плевральные или перитонеальные выделения, и 38 из них были доступны. Все образцы собирали в стерильных пробирках и сразу центрифугировали при 4 ° С для удаления клеток. Аликвоты супернатантов замораживали при -70 ° C до анализа антител и ДНК HHV-8.

Количество лимфоцитов и моноцитов периферической крови у здоровых пациентов и пациентов с ТБ анализировалось с использованием автоматизированного гематологического анализатора (XE-2100, Sysmex, Kobe, Japan) до сбора проб плазмы.

Средний возраст 91 мужчин-контролей (62,5 ± 12,6 лет) и 38 женщин-контролей (58,9 ± 17,2 года) были одинаковыми (p = 0,18, t-тест), а также средние возрасты 91 мужчин-больных ТБ (62,3 ± 12,6 года) и 38 женщин-больных туберкулезом (58,9 ± 17,2 года) (p = 0,22, t-тест). Средний возраст больных туберкулезом с выпотом (60,1 ± 17,1 года, 29 мужчин и 11 женщин) и без выпота (61,8 ± 12,6 года, 62 мужчины и 27 женщин) также были похожи (p = 0,52, t-тест). Все пациенты и контрольные группы были отрицательными для антител к ВИЧ.

Коммерчески доступный набор IFA (Advanced Biotechnologies Inc, Columbia, MD) использовался для обнаружения антител к HGV-8 иммуноглобулину G (IgG) против литических антигенов в образцах плазмы и эффузии в соответствии с инструкциями производителя. Этот анализ основывался на клеточных линиях лимфомы полости полости HHV-8. Образцы плазмы или эффузии при различных разведениях приводили в контакт с фиксированными инфицированными клетками и исследовали микроскопически с использованием флуоресцентного микроскопа. Образцы, которые отображали флуоресценцию при разведении 1:40, считались положительными. Максимальные разведения антител к HHV-8 определяли с помощью IFA конечной точки.

ДНК HHV-8 экстрагировали и ПЦР-амплифицировали из плазмы и выпота каждого пациента, как сообщалось ранее [11].

Образцы плазмы анализировали на антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 с использованием набора реактивов против вируса HIV 1 + 2 Vitros, контроля и калибратора (Ortho-Clinical Diagnostics, High Wycombe, England) и иммунодиагностической системы Vitros ECi (Ortho- Clinical Diagnostics, Rochester, NY) в соответствии с инструкциями производителя.

Для оценки значимости различий между группами в категориальных переменных использовался тест χ2 или точный критерий Фишера. Значение различий в средствах непрерывных переменных из двух групп определялось с помощью t-теста. Сравнение титров плазмы с анти-HHV-8 в здоровых контролях и больных туберкулезом было проанализировано с использованием теста Манна-Уитни. Значение p менее 0,05 считалось значительным. Статистический анализ проводился с использованием SPSS версии 12.0 для Windows (SPSS, Чикаго, Иллинойс).

Двадцать два здоровых контроля (17,1%, 17 мужчин и 5 женщин) и 40 ТБ пациентов (31,0%, 29 мужчин и 11 женщин) были положительными для антител к ВГЧ-8. Показатель серопозитивности HHV-8 и титры антител к HHV-8 был значительно выше у пациентов с ТБ, чем при здоровом контроле (p = 0,009 по критерию χ2 и p = 0,005 по тесту Манна-Уитни, соответственно) (таблица 1). Средний возраст был аналогичным у здоровых лиц, которые были сероположительными и серонегативными, у больных туберкулезом, которые были серопозитивными и серонегативными, а также у больных туберкулезом с или без выпот (p> 0,05 для всех 3 сравнений, t-тест). Уровень серопозитивности также был сходным с мужским и женским здоровым контролем, у мужчин и женщин-больных туберкулезом, а также у больных туберкулезом с и без выпот (p> 0,05 для всех 3 сравнений по χ2 или точным тестом Фишера). Таблица 1Age, количество лимфоцитов, количество моноцитов, серопозитивность HHV-8, титр антител против HHV-8 и наличие ДНК HHV-8 у пациентов с ТБ, а также здоровые контролируемые по возрасту и полу

HHV-8 человека герпесвируса типа 8, IFA мюмофлуоресценции, туберкулез туберкулеза

aMean ± стандартное отклонение. bPositive в IFA. с
Т-тест. dx2. Тест eMann-Whitney. Точный тест fFisher. Количество лимфоцитов и моноцитов у 9 больных туберкулезом отсутствовало

Пациенты с эффузиями (n = 40) и без эффузий (n = 89) имели сходную серопозитивность HHV-8, титр антител к HHV-8 и положительность ДНК HHV-8 в плазме (p = 0,56 по критерию χ2, p = 0,45 Манн-Уитни и р = 0,67 по точному тесту Фишера соответственно) (таблица 2). Таблица 2Аге, количество лимфоцитов, количество моноцитов, серопозитивность HHV-8, титр антител против HHV-8 и наличие HHV-8 ДНК у больных туберкулезом с и без выпот

HHV-8 человека герпесвируса типа 8, IFA мюмофлуоресценции, туберкулез туберкулеза

aMean ± стандартное отклонение. bPositive в IFA. с
Т-тест. dx2. Тест eMann-Whitney. Точный тест fFisher. Количество лимфоцитов и моноцитов у 9 больных туберкулезом без выпот отсутствовало

Образцы эффузы 2 ТБ пациентов с плевральными выпотами были недоступны, но плазма 1 из этих пациентов была положительной для ДНК HHV-8 (472 экз / мл) (таблица 2). Положительные показатели и титры антител к HHV-8 в образцах плазмы и эффузии у остальных 38 пациентов с эффузиями (3 с асцитом и 35 с плевральным выпотом) были одинаковыми (p = 0,45 по критерию χ2, p = 0,50 Mann-Whitney тест, соответственно) (таблица 3). Образцы плазмы и эффузы у 38 пациентов, чьи выпоты были доступны, были отрицательными для ДНК HHV-8. Таблица 3 Число пациентов с ТБ, которые тестировали положительный результат на антитела против HHV-8 в плазме и в образцах перитонеального или плеврального выпота

HHV-8, вирус герпеса человека 8; IFA, иммунофлуоресцентный анализ; ТБ, туберкулез

aPositive в IFA. b Не удалось получить образцы 2 больных из 40 больных туберкулезом с выпотом. cχ2. Тест dMann-Whitney

Образцы плазмы 3 из 89 пациентов без эффузий, которые были отрицательными для антител к HHV-8, были положительными для ДНК HHV-8 (544, 899 и 1011 копий / мл). Более того, у 2 пациентов без эффузий, которые были положительными для антител к HHV-8, были положительными для ДНК HHV-8 (1415 и 3720 копий / мл). Таким образом, образцы плазмы пациентов с 6 ТБ, но ни один из здоровых контролей, не были положительными для ДНК HHV-8 (p = 0,03) (таблица 1).

У пациентов с ТБ было намного меньше лимфоцитов крови и моноцитов, чем у здоровых людей (p 0,05 для обоих: t-тест) и аналогичные количества моноцитов крови (318 ± 109 / мкл против 301 ± 115 / мкл и 546 ± 251 / мкл против 565 ± 368 / мкл соответственно, p> 0,05 для обоих; Т-тест).

У больных ТБ с эффузиями наблюдалось достоверно меньшее количество лимфоцитов крови, чем у пациентов без эффузий (1112 ± 452 / мкл против 1380 ± 729 / мкл, p = 0,035, t-тест) (таблица 2). Среди больных туберкулезом с и без выпот количество лимфоцитов крови было сходным для тех, кто был серонегативным и сероположительным HHV-8 (1125 ± 448 / мкл против 1078 ± 484 / мкл и 1428 ± 727 / мкл против 1283 ± 793 / мкл, соответственно, p> 0,05 для обоих: t-тест). Количество моноцитов крови у пациентов с серонегативным и серопозитивным туберкулезом HHV-8 с и без выпота также было одинаковым (534 ± 222 / мкл против 621 ± 428 / мкл и 552 ± 268 / мкл против 542 ± 346 / мкл соответственно, p> 0,05 для обоих: t-тест).

Ни один из пациентов с ТБ, которые были положительными для антител к HHV-8 или ДНК HHV-8, имели клинические проявления инфекции HHV-8, такие как KS, PEL или болезнь Каслмана.

Основной вывод настоящего исследования состоит в том, что ВИЧ-отрицательные индивидуумы с туберкулезом легких, как с эффузией, так и без него, имели большую серопозитивность для антител против HHV8, чем здоровые контролируемые по возрасту и полу. Эти результаты согласуются с результатами нашего предыдущего исследования пациентов с туберкулезной пневмонией [11]. Точка отсечения для серопозитивности HHV-8 в настоящем исследовании была установлена ​​в 1:40 согласно инструкциям производителя. В нашем недавнем исследовании серопозитивности HHV-8 у пациентов с терминальной стадией почечного заболевания один из двух здоровых контролей с титрами антител IFA 1: 160 показал положительность в специфическом иммуноферментном анализе с ферментным связыванием (ELISA) [16]. Если в нашем предыдущем исследовании точка отсечения для серопозитивности была установлена ​​в 1: 160, то серопозитивная частота среди больных туберкулезом была незначительно выше (5/101 против 0/101, p = 0,059, точный тест Фишера) [11], но в настоящем исследовании серопозитивная скорость будет оставаться значительно выше у пациентов, чем в контроле (8/129 против 1/129, p = 0,036, точный тест Фишера). Это расхождение может быть связано с меньшим количеством предметов в предыдущем исследовании.

Настоящее исследование показало, что серопревалентность HHV-8 была одинаковой среди больных туберкулезом с и без выпот (27,5 против 32,6%). Как отмечалось в нашем предыдущем исследовании пациентов с туберкулезом легких [11], серопревалентность HHV-8 у ВИЧ-отрицательных больных туберкулезом с плевральными выпотами была ниже, чем у ВИЧ-отрицательных пациентов с KS (52-100%) и сопоставима с таковой в отношении ВИЧ — положительные пациенты без КС (13-50%) [8-10, 17]. Это говорит о том, что инфекция HHV-8 имеет сходные роли у пациентов с ТБ и без выпот. Тем не менее, исследовательские группы, включенные в настоящее и предыдущие исследования, были намного старше, чем люди, которые имеют наибольший риск заражения ВИЧ.

Предыдущие исследования показали, что распространенность инфекции HHV-8 увеличивается с возрастом [18-20], а KS чаще встречается у пожилых мужчин [21]. Наше предыдущее сравнение больных туберкулезом и здорового контроля [11] показало сходную распространенность серопозитивности HHV-8 для мужчин и женщин и аналогичных средних возрастов для серопозитивных и серонегативных субъектов. В согласии, настоящее исследование продемонстрировало аналогичную сероположительность для мужчин и женщин, аналогичные средние возрасты для серонегативных и серопозитивных субъектов и аналогичную серопозитивность для больных ТБ с и без выпот.

В нашем предыдущем исследовании сообщалось о сходной позитивности ДНК HHV-8 у больных туберкулезом и здоровых контролях (4/101 против 0/101, p = 0,12) [11]. Однако настоящее исследование показало, что положительная активность ДНК HHV-8 была значительно выше в группе ТБ, чем в контрольной группе (6/129 против 0/129, p = 0,03). Эти несоответствующие выводы могут быть связаны с меньшим количеством субъектов в нашем предыдущем исследовании.

Наше предыдущее исследование пациентов с циррозом и асцитом показало положительную скорость, а титры антител против HHV-8 были значительно выше в плазме, чем асцит (p

HHV-8 связан с PEL, редкой формой злокачественной клональной B-клеточной лимфопролиферации [12]. Среди пациентов с PEL уровень ДНК HHV-8 в образцах эффузии значительно выше, чем в образцах крови [13]. Напротив, настоящее исследование показало, что образцы плазмы и эффузы у 38 больных туберкулезом с доступными выделениями были отрицательными для ДНК HHV-8. Это говорит о том, что роль HHV-8 различна у пациентов с ТБ и у пациентов с ПЭЛ.

В настоящем исследовании было установлено, что больные туберкулезом с или без эффузии имеют более низкое количество лимфоцитов и более высокие количества моноцитов, чем здоровые контрольные группы (p

Это четыре ограничения в настоящем исследовании. Во-первых, хотя это первое исследование для всестороннего исследования распространенности HHV-8 у больных туберкулезом с перитонеальными или плевральными выпотами, все участники были набраны из одной учебной больницы. Таким образом, результаты могут не соответствовать общей ситуации на Тайване или в других частях мира. Во-вторых, метод ПЦР, используемый в этом исследовании, может обнаруживать только 5-10 копий ДНК HHV-8 и поэтому может быть недостаточно чувствительным для окончательного установления наличия или отсутствия ДНК HHV-8. Вопрос о том, могут ли пациенты, такие как участвующие в этом исследовании, иметь ДНК HHV-8 на уровнях менее 5-10 копий / мл, могут быть увеличены, если чувствительность обнаружения может быть увеличена. В-третьих, мы не исследовали потенциал общей основной причины инфекции ТБ и ВГЧ-8, такой как социально-экономический статус, условия питания и поведение, связанное со здоровьем. В-четвертых, у нас не было данных о каких-либо сопутствующих заболеваниях или вспомогательных методах лечения в нашем туберкулезном населении, и мы ожидаем, что они будут относительно распространены у пожилых людей, таких как у наших исследователей.

Серопозитивность и титры антител против HHV-8 и серопозитивность ДНК HHV-8 были значительно выше у больных ТБ с или без перитонеального или плеврального выпота, чем при здоровом контроле. Распространенность HHV-8 у больных ТБ с или без выпот сопоставима с показателем, ранее сообщаемым для ВИЧ-инфицированных пациентов без КС. Таким образом, наше исследование показывает, что больные туберкулезом с или без излияний являются уязвимыми для инфекции HHV-8, аналогичной ВИЧ-инфицированным пациентам. Мы также обнаружили, что серопозитивность и титры антител против HHV-8 и серопозитивность ДНК HHV-8 были одинаковыми для больных туберкулезом с и без эффузии, что свидетельствует о сходной роли HHV-8 в этих двух группах больных туберкулезом. У больных туберкулезом с выпотом наблюдалось достоверно меньшее количество лимфоцитов крови, чем у пациентов без выпот. Это может быть связано с производством IL-8, опосредованным стимулированными перитонеальными или плевральными макрофагами, и последующей индукцией хемотаксиса лимфоцитов в полости тела.

Энзим-связанный иммуносорбентный анализ

Вирус герпеса человека 8

Вирус иммунодефицита человека

Иммунофлуоресцентный анализ

Интерлейкин-8

Саркома Капоши

Открытая рамка считывания

Полимеразной цепной реакции

Первичная эффузионная лимфома

Туберкулез.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

УХУ внесли вклад в финансирование и концепцию, разработку и проведение исследований; SMT, CLL и MNL собрали данные; SMT и CCS проанализировали и интерпретировали данные и способствовали написанию статьи; CCS и JPT провели статистический анализ; все авторы участвовали в критическом анализе и интерпретации данных. Все авторы прочитали и утвердили окончательную рукопись.

Это исследование было поддержано грантами DTCRD96 (2) -02 и DTCRD101 (2) -E-07 от буддийской больницы Dalin Tzu Chi, округа Chiayi, Тайвань. Фундер не играл никакой роли в дизайне исследования, в сборе, анализе и интерпретации данных; при написании рукописи; и в решении представить рукопись для публикации.