Реакция иммунофлуоресценции при герпесе
Herpes Simplex Virus 1/2, иммунофлюоресценция
Идентификация вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов (Herpes simplex 1/2), основанная на явлении флюоресценции, возникающей при связывании антигена HSV 1/2 и специального реагента (антитела, меченного флюорохромом) и наблюдаемой с помощью флюоресцентной микроскопии.
Синонимы русские
Вирус простого герпеса 1-го и 2-го типа, герпес-вирусная инфекция, ИФ.
Синонимы английские
HSV 1/2, immunofluorescence, immunofluorescence staining, immunofluorescence analysis.
Метод исследования
Иммунофлюоресценция.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок урогенитальный, мазок из носоглотки, мазок с конъюнктивы.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок до менструации или через 2-3 дня после ее окончания.
- Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка.
Общая информация об исследовании
Оба типа простого герпеса (HSV 1/2) относятся к ДНК-содержащим оболочечным вирусам. Они являются самыми распространенными вирусными патогенами и способны вызывать целый спектр заболеваний, в том числе простой пузырьковый лишай («лабиальный герпес», HSV-1, и «генитальный герпес», HSV 1/2), гингивостоматит и кератоконъюнктивит, а также более тяжелые состояния (энцефалит, диссеминированную герпетическую инфекцию новорождённого). В структуре оболочки HSV 1/2 обнаружены белковые молекулы, обладающие специфическими для этого возбудителя вирулентными и антигенными свойствами (ngB, ngC, ngD и другие). В лабораторной диагностике эти антигены используются для идентификации HSV 1/2. Один из методов их выявления – иммунофлюоресценция.
Иммунофлюоресценция (ИФ) – это иммуногистохимическое исследование, позволяющее выявить антиген возбудителя в образце биоматериала. Она основана на взаимодействии антигена HSV 1/2 и специфического для него антитела, маркированного флюоресцентным красителем (флюорохромом), а также на регистрации флюоресценции при изучении биоматериала в ультрафиолетовом свете. Метод позволяет получить результат в более короткие сроки, чем выделение вируса в культуре клеток, а также характеризуется большей точностью по сравнению с другим распространенным анализом – пробой Цанка с окраской по Райту – Гимзе.
Чувствительность ИФ зависит от стадии герпес-вирусной инфекции. Наиболее точный результат будет получен при анализе отделяемого из везикул и «свежих» эрозий. При этом чувствительность теста составляет около 70 %. Обнаружение вируса с помощью ИФ менее вероятно, если отделяемое получено из язвенных дефектов, пустулезных элементов или корок. По этой причине для диагностики герпес-вирусной инфекции с помощью ИФ рекомендуется повторное (многократное) взятие биоматериала. Также чувствительность теста максимальна при взятии отделяемого при самых первых высыпаниях и значительно снижается через 72 часа (составляет 19 %). Наибольшая чувствительность достигается при исследовании образцов, полученных из элементов «генитального герпеса», по сравнению с элементами другой локализации. Необходимо также отметить, что чувствительность теста снижается при анализе биоматериала, взятого на фоне лечения противовирусными препаратами. Учитывая эти особенности, интерпретировать отрицательный результат следует с учетом клинической картины и некоторых других лабораторных данных.
ИФ характеризуется достаточно высокой специфичностью (96-99 %). Это означает, что положительный результат теста позволяет с уверенностью подтвердить диагноз «герпес-вирусная инфекция».
ИФ может быть с успехом применена при обследовании пациентов из группы риска по герпес-вирусной инфекции (например, пациентов, имеющих несколько половых партнеров) и с ее симптомами. Наоборот, не следует использовать метод ИФ при обследовании пациентов без факторов риска (например, девочек препубертатного возраста) и пациентов с бессимптомной инфекцией HSV1/2. Учитывая распространенность бессимптомной инфекции HSV1/2 среди беременных, данный анализ не рекомендован для обследования планирующих беременность и беременных без клинических признаков генитального герпеса.
При подтверждении диагноза «генитальный герпес» с помощью ИФ также рекомендуется обследование на другие инфекции, передаваемые половым путем (гонорею, трихомониаз, хламидиоз и др.). Кроме того, следует обследоваться на ИППП всем половым партнерам пациента.
Для чего используется исследование?
Для диагностики:
- простого пузырькового лишая;
- герпетического гингивостоматита;
- герпетического кератоконъюнктивита.
Когда назначается исследование?
При симптомах:
- «генитального герпеса» у мужчин (сгруппированные везикулезные, эрозивные или язвенные высыпания в области гениталий или бедер, дизурия, дискомфорт в паховой области или промежности);
- «генитального герпеса» у женщин (к описанным симптомам добавляются слизистые выделения из влагалища и диспареуния);
- герпетического кератоконъюнктивита (острое начало болезни, слезотечение, светобоязнь, блефароспазм, инъекции сосудов склеры, интенсивная боль в области пораженного глаза);
- герпетического гингивостоматита (острое начало болезни, лихорадка, отек и эритема десен, болезненная шейная лимфаденопатия, а также везикулезные высыпания в ротовой полости и на коже периоральной области).
Что означают результаты?
Референсные значения: не обнаружено.
Причины положительного результата:
- герпес-вирусная инфекция.
Причины отрицательного результата:
- отсутствие герпес-вирусной инфекции.
Что может влиять на результат?
- Применение ацикловира, ганцикловира и фоскарнета могут приводить к ложноотрицательному результату.
Также рекомендуется
- Herpes Simplex Virus 1/2, ДНК [реал-тайм ПЦР]
- Herpes Simplex Virus 1/2, IgM
- Herpes Simplex Virus 1/2, IgG
- Chlamydia trachomatis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
- Ureaplasma species, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]
- Trichomonas vaginalis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
- Neisseria gonorrhoeae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
- Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
- Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
- Интимный – 9 тестов по моче
- Интимный – оптимальный – анализ мазка у женщин
- Интимный – оптимальный – анализ мазка у мужчин
Кто назначает исследование?
Дерматовенеролог, уролог, офтальмолог, ЛОР.
Литература
- Domeika M, Bashmakova M, Savicheva A, Kolomiec N, Sokolovskiy E, Hallen A, Unemo M, Ballard RC; Eastern European Network for Sexual and Reproductive Health (EE SRH Network). Guidelines for the laboratory diagnosis of genital herpes in eastern European countries. Euro Surveill. 2010 Nov 4;15(44).
- Caviness AC, Oelze LL, Saz UE, Greer JM, Demmler-Harrison GJ. Direct immunofluorescence assay compared to cell culture for the diagnosis of mucocutaneous herpes simplex virus infections in children. J Clin Virol. 2010 Sep;49(1):58-60.
- Scicchitano LM, Shetterly B, Bourbeau PP. Evaluation of light diagnostics SimulFluor HSV/VZV immunofluorescence assay. Diagn Microbiol Infect Dis. 1999 Nov;35(3):205-8.
- Lafferty WE, Krofft S, Remington M, Giddings R, Winter C, Cent A, Corey L. Diagnosis of herpes simplex virus by direct immunofluorescence and viral isolation from samplesof external genital lesions in a high-prevalence population. J Clin Microbiol. 1987 Feb;25(2):323-6.
- Schmidt NJ, Gallo D, Devlin V, Woodie JD, Emmons RW. Direct immunofluorescence staining for detection of herpes simplex and varicella-zoster virus antigens in vesicular lesions and certain tissue specimens. J Clin Microbiol. 1980 Nov;12(5):651-5.
Источник
Герпес — это одно из наиболее распространенных вирусных заболеваний на планете. По данным статистики, не менее 90% населения является носителями этого вируса. Клинические признаки отличаются при разных типах герпеса, болезнь может проявляться на коже и слизистых оболочках. Анализ крови на герпес 1 и 2 типа и расшифровка данных — это способ выявить возбудителя, определить его тип и выбрать подходящую схему лечения.
Что представляет собой возбудитель?
Возбудитель герпеса — это ДНК-содержащий вирус. Чаще всего он поражает кожу лица, слизистые оболочки глаз, половых органов, реже — ткани нервной системы и внутренние органы.
Заражение может происходить одним из следующих способов:
- контактным (в том числе при использовании общих предметов быта и личной гигиены);
- воздушно-капельным;
- половым;
- вертикальным (от матери к ребенку при беременности и в процессе родов).
После проникновения в организм вирус может не проявляться клинически в течение длительного времени. Иммунная система человека держит популяцию возбудителя под контролем, и он не способен размножаться. Первые симптомы возникают при снижении уровня иммунной защиты, в том числе при сезонных иммунодефицитах. Поэтому герпес часто сопровождает другие вирусные и бактериальные заболевания, грибковые инфекции.
Больной может не знать, что является вирусоносителем, но при этом заражать окружающих.
Герпесвирус 1 типа
Вирус простого герпеса первого типа — это самый распространенный возбудитель. Он проникает в организм человека еще в детском возрасте и дает периодические рецидивы.
Чаще всего болезнь локализуется на коже лица и тела и проявляется следующими симптомами:
- покраснение кожи в месте активизации вируса;
- появление мелкой сыпи (пузырьки вскрываются самостоятельно, а на их месте образуются язвы);
- зуд и отечность.
Заболевание проявляется локально, но некоторые пациенты жалуются также на повышение температуры, озноб, слабость и мышечную боль. В период рецидива герпеса больной максимально опасен для окружающих, так как возбудитель находится в содержимом пузырьков.
Герпесвирус 2 типа
Герпес второго типа относят к заболеваниям, передающимся половым путем. Кроме того, существуют еще контактный, бытовой и вертикальный пути передачи. Клинически болезнь проявляется сыпью на половых органах и коже бедер. Исследования на герпесвирус обязательны при беременности. Вирус опасен для плода: существует риск развития патологий, а также инфицирования младенца во время родов.
В каких случаях нужно обращаться в лабораторию?
Во время рецидива болезни вирус герпеса 1 и 2 типа можно определить путем простого осмотра. Характерная зудящая сыпь, которая имеет определенную локализацию, — это единственный признак, который будет являться основанием для постановки диагноза. Кроме того, пузырьки часто появляются на одном и том же месте, с одинаковой стороны.
Сдавать кровь в лабораторию для анализа нужно только в нескольких случаях:
- если герпес проявляется нестандартно, в стертой форме или с осложнениями;
- во время планирования беременности;
- если нужно выяснить срок заражения (например, при беременности для оценки потенциального риска для плода).
Сыпь может служить признаком большого количества заболеваний инфекционного и незаразного происхождения. По данным анализа крови можно определить тип вируса, убедиться в диагнозе и назначить лечение по необходимости.
Методы определения вируса герпеса в крови
Существует несколько методик обнаружения герпесвируса в крови. Они эффективны при спорных ситуациях, а также в тех случаях, если болезнь протекает бессимптомно. Во время рецидива можно также исследовать содержимое пузырьков, соскобы кожи или мазки слизистых оболочек. Лечащий врач определит, какие анализы нужно сдать, исходя из возможностей лаборатории и финансового положения пациента.
Существует несколько стандартных правил, которые позволят получить наиболее точный результат. Анализы сдают на голодный желудок. Чаще всего кровь собирают утром, с 8 до 10 часов. Накануне не стоит употреблять жирную пищу и алкоголь. Также на результат анализов могут повлиять стрессы или любое другое эмоциональное перенапряжение.
Анализ на герпес 1 и 2 типа чаще всего проводят двумя методами — ПЦР (полимеразная цепная реакция) и ИФА (иммуноферментный анализ). Также могут использоваться другие способы, в зависимости от оснащения лаборатории и ее технических возможностей.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
ПЦР — это чувствительная реакция, которая позволяет обнаружить в исследуемом материале ДНК вирусных клеток. Суть метода сводится к тому, что определенный ген многократно копируют, в результате чего можно выявить наличие и тип возбудителя. Важно, что реакция не произойдет, если исследуемой ДНК в материале нет.
Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить вирус непосредственно после заражения, задолго до того, как болезнь начнет проявляться клинически. Также ее назначают в тех случаях, когда нужно определить конкретный тип вируса, а не просто его наличие.
Лаборатория предоставляет бланки с показателями, которые легко расшифровать самостоятельно. Положительный результат свидетельствует о присутствии вируса в крови, отрицательный — об отсутствии. Это наиболее достоверный и чувствительный анализ, который выявляет даже самую малую концентрацию возбудителя. Полимеразная цепная реакция дает один из наиболее достоверных результатов, поэтому считается дорогостоящей. Также в бланках содержится информация о типе герпеса.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
ИФА — это реакция, которая основана на выделении комплекса антиген—антитело. Вирус герпеса 1 или 2 типа— это антиген для организма (чужеродное вещество), в ответ на который иммунная система выделяет специальные белки — антитела (иммуноглобулины или Ig).
Антитела переносятся в током крови по организму в очаг заболевания и там начинают бороться с инфекцией. Существует несколько основных классов иммуноглобулинов, которые можно обнаружить по время анализа на герпес:
- IgM — это первые антитела, которые формируются в организме больного. В крови пациента их можно найти в течение 2-х недель с момента инфицирования. Кроме того, эти белки появляются в период пробуждения вируса при хроническом герпесе.
- IgG — это антитела, на основании которых можно говорить о хронической инфекции, которая находится в организме больного уже в течение длительного времени. Количество иммуноглобулинов этого класса резко возрастает при очередном рецидиве герпеса.
- IgG к предранним белкам вируса герпеса — это белки-антитела, которые возникают в крови вслед за IgM и также указывают на наличие заболевания в острой или хронической форме.
- Оценивают и такой показатель, как авидность IgG. Он характеризует способность этого иммуноглобулина связываться с вирусом и образовывать комплекс антиген—антитело. В начале болезни этот показатель слабо выражен, но в активную фазу заболевания резко возрастает.
Расшифровку результатов проводит врач. В каждой лаборатории существуют собственные показатели нормы. Больной получает бланк, в котором указаны его значения антител, а также те, от которых необходимо отталкиваться. Если количество иммуноглобулинов ниже нормы — результат отрицательный, если выше — положительный.
Далее необходимо сопоставить концентрацию разных классов антител в крови и расшифровать данные по таблице:
| IgM | IgG к предранним белкам | Поздние IgG | Результат |
| — | + | + | Если ранее пациент не болел герпесом, такой результат говорит о первичной острой инфекции. При беременности в таком случае существует угроза для плода. Если человек — носитель вируса (болезнь ранее проявлялась клинически или обнаруживалась лабораторным способом), речь идет о рецидиве герпеса. Иммунная система матери при беременности обеспечивает защиту плоду, но может быть необходимо ее лечение. |
| — | — | + | Пациент является носителем вируса простого герпеса, и в его организме выработан иммунитет, который не позволяет болезни проявляться клинически. Такой результат обнаруживают в периоды ремиссии герпеса. |
| + | + | — | Такие данные говорят о первой стадии развития герпесной инфекции. В эту фазу существует угроза для жизни плода. |
| + | + | + | |
| — | — | — | Человек никогда не сталкивался с вирусом герпеса, и его иммунная система не предоставляет защиту от него. Если этот анализ проводится во время беременности, врачи беспокоятся о занесении инфекции и развития острого герпеса. В таком случае состояние плода будет находиться под угрозой. |
Отдельно проводится расшифровка анализов на авидность IgG. Возможные результаты представлены в таблице:
| Индекс авидности, % | Результат |
| 50—60% | Этот показатель является пороговой зоной и не может говорить о каком-либо результате. Исследования необходимо повторить через 14 дней. |
| Ниже 50% | Результат говорит о наличии низкоавидных иммуноглобулинов. Они обнаруживаются при первичной инфекции. |
| Выше 60 % | Выявлены высокоавидные иммуноглобулины. Такой результат может появляться при хроническом герпесе или у носителей вируса. |
| Отрицательно | Организм пациента никогда не контактировал с вирусом. При беременности необходимо следить за показателями, поскольку иммунная защита как матери, так и плода, отсутствует. |
Результаты анализов могут отличаться в разных лабораториях. Они зависят от оборудования и других факторов, но, в основном, бывают достоверными.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
РИФ — это еще один способ обнаружить вирус в исследуемом материале, в том числе в крови. Эта реакция показывает наиболее точный результат, если концентрация возбудителя высока. Суть метода сводится к добавлению в субстрат (кровь) специальных красителей с антителами и его последующей микроскопии. Если вирус присутствует, он вступает в химические реакции с антителами и светится под микроскопом.
Расшифровка анализа крови на герпес путем РИФ — это результаты микроскопии. Характерное свечение говорит о наличии возбудителя. На точность данных повлияет не только количество вируса герпеса, но и наличие другой инфекции в крови. Если она там находится в высокой концентрации, можно получить ложноположительный результат.
Культуральный метод
Этот метод заключается в выделении вируса из исследуемого материала и заражении биологических объектов (культуры клеток, куриных эмбрионов) в лабораторных условиях. Способ требует больших затрат времени и не используется в обычных ситуациях. Чаще всего его применяют для научных исследований. Для его выполнения необходима специально оборудованная вирусологическая лаборатория для изоляции возбудителя в помещении и предотвращения его распространения.
Заключение
Герпес — это одно из наиболее распространенных заболеваний в мире. Его характерная особенность заключается в том, что возбудитель остается в крови пациента в течение многих лет и только иногда вызывает клинические проявления болезни. Он не представляет опасности для взрослого человека, но может спровоцировать патологии беременности и передаваться от матери к ребенку при родах. Лучший способ профилактики герпеса — поддержка собственной иммунной системы, которая будет контролировать популяцию вируса и предотвратит появление симптомов болезни.
Источник
Столкнувшись с поражением кожи необходимо быстро диагностировать болезнь для проведения эффективного лечения и, первым делом, совершить обследование на герпес, поскольку этот недуг имеет много форм и требует клинических исследований. Показатели в бланках анализов не всегда понятны, поэтому нужно уметь правильно их трактовать для понимания картины заболевания и выбора лекарственных средств.
Показания к обследованию при герпесе
Сдавать анализ крови на герпес можно как при подозрении на появление симптомов недуга, так и в ряде неклинических случаев. Обязательно нужно проходить обследование при выявлении на коже лица в окологубной зоне, в паху или вокруг торса маленьких пузырьков с жидкостью, характерных для заболевания. Анализ крови на вирусы, в том числе на наличие герпетической инфекции, обязательно делается при беременности, поскольку невылеченная инфекция способна проявиться и у ребенка. Диагностика поможет выявить антитела к герпесу, и укажет на тип заболевания в случае, если результат окажется положительный. Многие люди являются пассивными носителями вирусов, поэтому чтобы от них не заразились окружающие лучше заранее обратиться в клинику и диагностировать вирус простого герпеса.
Вернуться к оглавлению
Виды анализов и расшифровка
Чтобы выявить наличие заболевания, достаточно провести исследование крови на вирус герпеса в тест-лаборатории. Современные диагностические методики позволяют выявлять герпес 1 и 2 типа. Первым типом недуга болеют все люди, а 2-й относится к сугубо генитальным, передающимся при половом контакте или орально. Для распознавания инфекции пользуются различными способами анализирования крови, такими как:
Анализы крови дают возможность поставить точный диагноз больному.
- реакцией ИФА на герпес;
- серологическим методом;
- иммунофлюоресценцией;
- проведением вирусологического контроля и ПЦР.
Правильная расшифровка анализа крови на герпес важна, как и качество самой диагностики. Если показатели нормальные при одном анализе, это не значит, что они будут таковыми при другом диагностическом методе, особенно когда норма балансирует на границе допустимых значений. Поэтому в особо тяжелых случаях назначают комплексную лабораторную диагностику крови, соскобов и мочи.
Вернуться к оглавлению
ПЦР-исследование
Этим методом герпесвирусы диагностируют в крови и в моче, слюне и мокроте. Способ предназначен для выявления инфекции на ранней стадии. Чтобы определить возбудителя болезни достаточно сдать анализ мочи и мокроты. Проверка жидкостей методом ПЦР не покажет тип заболевания, нужен развернутый анализ крови. Когда результаты отрицательные, им можно доверять, точность диагностики высокая. ПЦР проводят для распознавания ДНК возбудителя опоясывающего лишая и генитального герпеса. Другие разновидности лабораторных тестов не распознают настолько явно эти типы вирусов.
Вернуться к оглавлению
ИФА-диагностика
Иммуноферментальная проверка считается фаворитом обледований. Сдача на анализ крови ИФА позволяет выявлять все виды возбудителей герпесного недуга, стадии болезни, пассивное наличие вирусов в организме, развитие заболевания и рецидив. Способ основан на выявлении иммуноглобулинов, которые возникают на разных стадиях прогресса ВПГ. В первую очередь диагностируются IgM, после них фиксируется присутствие иммуноглобулинов LgG. Чем насыщеннее ими кровь, тем явственнее рецидив.
Такой анализ позволяет наблюдать за прогрессированием болезни.
Важным показателем при ИФА крови является активность антител по вступлению во взаимодействие с вирусными клетками для их уничтожения. На ранней стадии развития более высокоавидные IgM, а при хроническом течении инициатива переходит к LgG. Наблюдая за антителами, выявляют фазу развития болезни. ИФА делится на два вида:
- Качественные пробы, которые показывают присутствие антител к возбудителям герпесного недуга и позволяют определить тип заболевания, выяснить риск рецидива.
- Количественные показатели, дающие возможность измерить плотность иммуноглобулинов и оценить состояние иммунитета.
ИФА-проверка выдает самый точный результат на определение всех видов герпетических инфекций.
Вернуться к оглавлению
Иммунограмма
Для определения ВПГ натощак берется венозная кровь с целью распознавания иммуноглобулинов. Обследование вспомогательное, и проводится для оценивания состояния иммунной системы. Помогает назначить правильные иммуномодуляторы и составить действенный курс терапии, чтобы быстрее вылечить вирусную инфекцию. Иммунограмму целесообразно проводить вместе с ИФА или ПЦР-исследованием.
Вернуться к оглавлению
Серологические пробы
Данный метод диагностики преобладает над остальными своей точностью.
Метод применяется при ИФА, когда анализы на определение герпеса сдаются повторно. Тест выполняется для диагностирования на титры антител. Предписывается обследование при подозрении на генитальный ВПГ. Методология проверки построена на определении антител к герпетическим возбудителям в стадии развития инфекции, а также когда вирусы не проявляют себя, но присутствуют в организме. Серологический тест отличается высокой точностью. Для анализа необходима венозная кровь.
Вернуться к оглавлению
Культуральный метод
Называется так потому, что предполагает «культивирование» биологических материалов в благоприятной среде для выявления болезнетворных микроорганизмов. Полученный соскоб помещают в куриный эмбрион и проводят наблюдение, разовьется ли вирусная герпетическая инфекция. Этот вид обследования длительный по времени, но как и проверка крови методом ИФА, точно выявляет присутствие вируса герпеса и показывает разновидность заражения.
Вернуться к оглавлению
Реакция иммунофлюоресценции
Исследование позволяет наблюдать за большим количеством зараженных клеток.
В качестве материала для изучения герпетических антигенов берется общий анализ крови или генитальный соскоб. Методика позволяет узнать, есть ли инфекция, когда заражены большинство клеток, а наличие посторонних микроорганизмов минимально. В противном случае результат не будет абсолютно точным и потребуется дополнительно сдавать кровь на антитела. Повысить точность анализа можно за счет непрямой иммунофлюоресценции, когда окрашенный специальным реагентом титр антител взаимодействует с биоматериалом.
Вернуться к оглавлению
Другие способы
Помимо изучения кровяного материала, берут для дополнительных тестов соскобы пораженных тканей. Цитологический способ позволяет по кожным пробам обнаружить следы герпесвирусной инфекции, но не даст ответ насчет типа заболевания и вида вредоносных микроорганизмов. Отрицательный цитологический анализ на герпес свидетельствует об отсутствии возбудителей, при положительном нужна дополнительная кольпоскопия. При диагностировании генитального герпеса без нее не обойтись. Кольпоскопический способ хорош тем, что исследования покажут сопутствующие инфекции.
Источник
