Герпес 6 типа пцр количественный

Вирус герпеса 6 типа, ДНК HHV 6 т., количественный — количественное определение ДНК вируса герпеса (HHV) 6 типа в крови, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Метод ПЦР позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК вируса, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий, специфичных для данного возбудителя участка ДНК.

С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.

Герпесвирусы (Herpesviridae) — это большое семейство ДНК-содержащих вирусов, вызывающих разнообразные болезни у человека. Вирус герпеса 6-го типа (HHV-6, ВГЧ-6) является одним из восьми герпесвирусов, для которых человек является или единственным, или основным носителем.

HHV-6 — это ДНК-вирус подсемейства Betaherpesvirinae рода Roseolovirus, имеет два подтипа — А и B. Более распространён подтип В, однако подтип А чаще всего выявляют у пациентов с иммунодефицитами.

Полное самовоспроизведение вируса происходит только в Т-лимфоцитах, но HHV-6 может быть выявлен и в других клетках — моноцитах, В-лимфоцитах, а также в тканях мозга, печени, слюнных желез, в эндотелии.

Пути заражения HHV-6
Основной путь заражения — воздушно-капельный, со слюной. Не исключены случаи передачи вируса герпеса 6 типа от матери ребёнку при кормлении грудью или непосредственно во время родов. У 2% рожениц вирус герпеса присутствует в вагинальном секрете, а ещё у 1% — в крови в пуповине. Не удивительно, что при родах герпес легко может попасть в организм ребёнка через микротравмы и царапины.

Также существует возможность инфицирования при трансплантации органов, гемотрансфузиях, через медицинские инструменты. Наркоманы и медицинские работники могут заразиться при случайном уколе иглой шприца, содержащего кровь больного, либо инфицированного.

Наиболее часто герпесом 6 типа заболевают дети в возрасте от 7 до 24 месяцев.

Клинические признаки инфекции, вызванной HHV-6
Клиническим проявлением заболевания, вызываемого вирусом герпеса 6-го типа являются обширные мелкие высыпания на коже у ребёнка, которые часто именуют детской розеолой, шестой болезнью или псевдокраснухой. По всему телу ребёнка распространяются небольшие высыпания, немного приподнятые над кожей и обычно не вызывающие зуда, быстро развивающаяся сильная лихорадка, продолжающаяся 3–4 дня. Часто болезнь протекает бессимптомно, сходство внезапной экзантемы с симптомами кори или краснухи зачастую приводит к постановке ошибочного диагноза.

В некоторых случаях бывают осложнения со стороны центральной нервной системы (судороги на фоне высокой температуры, редко — энцефалит, менингоэнцефалит, серозный менингит).

Взрослые редко инфицируются ВГЧ-6, причём заражение у них может сопровождаться симптомами инфекционного мононуклеоза (вирус Эпштейна-Барр в таком случае отсутствует) или фульминантного гепатита.

HHV-6 у лиц с ослабленным иммунитетом
ВГЧ-6 способен вызвать отторжение трансплантата у реципиентов. Осложнения вследствие активации ВГЧ-6 отмечены у пациентов после пересадки костного мозга, почек, печени, лёгких. В частности, пациенты после трансплантации костного мозга часто страдают от заболеваний, обусловленных HHV-6 (интерстициальная пневмония, супрессия костного мозга, менингоэнцефалит). Активация ВГЧ-6 является причиной 80% случаев идиопатической лейкопении после трансплантации печени. К счастью, при своевременной диагностике, ВГЧ-6 поддаётся лечению с помощью лекарственных препаратов.

ВИЧ-инфицированные составляют ещё одну категорию лиц с иммунодефицитом, у которых активация ВГЧ-6 способна приводить к серьёзным осложнениям (к поражениям ЦНС, к пневмонии и пр.) и прогрессированию основного заболевания. Кроме того, активный ВГЧ-6 может способствовать переходу ВИЧ из латентной в активную форму, поэтому регулярный контроль активности ВГЧ-6 у ВИЧ-положительных пациентов важен для своевременного начала антивирусной терапии.

Герпесвирус HHV-6 вызывает такие заболевания, как рассеянный склероз, энцефалит, розовый лишай, лихорадка у детей с судорожным синдромом, инфекционный мононуклеоз, синдром хронической усталости, аутоиммунный тиреоидит, ретробульбарный неврит, печёночная недостаточность, рак. Существуют данные о том, что ВГЧ-6 является кофактором СПИДа, некоторых форм карцином шейки матки и назофарингеальных карцином.

Показания:

для подтверждения наличия/отсутствия инфекции;
для того, чтобы определить характер течения инфекции — активный/неактивный;
для дифференциальной диагностики герпетических инфекций.

Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи.

Накануне сдачи исследования нужно исключить физические и психоэмоциональные нагрузки.

Забор крови производится в соответствующую пробирку строго до метки.

Интерпретация результатов
Ответ выдаётся в количественном формате.

Причины положительного результата:

однократный положительный результат обычной ПЦР в образце цельной крови однозначно свидетельствует об инфицировании ВГЧ-6;
однократный положительный результат реал-тайм ПЦР в бесклеточных образцах плазмы и сыворотки крови однозначно свидетельствует об активной ВГЧ-6 инфекции.

Причины отрицательного результата:

однократный отрицательный результат обычной ПЦР в образце цельной крови однозначно свидетельствует об отсутствии ВГЧ-6;
однократный отрицательный результат реал-тайм ПЦР в бесклеточных образцах плазмы и сыворотки крови обследуемых, может быть признаком отсутствия активной ВГЧ-6-инфекции и нуждается в дополнительном подтверждении с помощью ретроспективных исследований вирусоспецифических IgG-антител.

Что может влиять на результат?
Свойство ВГЧ-6 поражать другие клетки напрямую, не выходя за их пределы, способствует ложноотрицательному результату.

Источник

Исследование для выявления возбудителя герпес-вирусной инфекции 6-го типа (Human Herpes Virus 6), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы русские

Герпес-вирус 6-го типа, ВГЧ-6, РТ-ПЦР.

Синонимы английские

HHV-6, DNA [Real-time PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, венозную кровь, ликвор, мазок из зева (ротоглотки), слюну.

Общая информация об исследовании

6-й тип герпес-вируса человека (ВГЧ-6) впервые был определен относительно недавно, в 1986 г., в крови ВИЧ-инфицированных пациентов. К настоящему времени установлено, что инфекция ВГЧ-6 широко распространена и имеет 2 подтипа, отличающихся генетически, – А и В. В целом более распространен подтип В, однако подтип А чаще обнаруживают у пациентов с иммунодефицитами.

Полная репликация вируса происходит только в Т-лимфоцитах, но ВГЧ-6 может быть выявлен и в других клетках – моноцитах, В-лимфоцитах, а также в ткани мозга, печени, слюнных желез, в эндотелии.

Наиболее вероятный путь заражения – воздушно-капельный, со слюной, не исключена передача инфекции от матери к ребенку во время беременности.

Первый раз заражение практически всегда происходит в возрасте от 4 до 24 месяцев. В большинстве случаев ВГЧ-6 протекает бессимптомно, а если проявляется, то чаще всего как внезапная экзантема и быстро развивающаяся сильная лихорадка, продолжающаяся 3-4 дня. Через несколько часов после нормализации температуры появляются эритематозные пятна или пятнисто-папулезная сыпь. Сходство внезапной экзантемы с симптомами кори или краснухи зачастую приводит к постановке ошибочного диагноза.

В некоторых случаях бывают осложнения со стороны центральной нервной системы (судороги на фоне высокой температуры, редко энцефалит, менингоэнцефалит, серозный менингит).

Взрослые редко инфицируются ВГЧ-6, причем заражение у них может сопровождаться симптомами инфекционного мононуклеоза (вирус Эпштейна – Барр в таком случае отсутствует) или фульминантного гепатита.

ВГЧ-6 способен вызвать отторжение трансплантата у реципиентов. Осложнения вследствие активации ВГЧ-6 отмечены у пациентов после пересадки костного мозга, почек, печени, легких. В частности, пациенты после трансплантации костного мозга часто страдают от заболеваний, обусловленных HHV-6 (интерстициальная пневмония, супрессия костного мозга, менингоэнцефалит). Активация ВГЧ-6 является причиной 80 % случаев идиопатической лейкопении после трансплантации печени. К счастью, при своевременной диагностике ВГЧ-6 поддается лечению с помощью лекарственных препаратов.

ВИЧ-инфицированные составляют еще одну категорию лиц с иммунодефицитом, у которых активация ВГЧ-6 способна приводить к серьезным осложнениям (к поражениям ЦНС, к пневмонии и пр.) и прогрессированию основного заболевания. Кроме того, активный ВГЧ-6 может способствовать переходу ВИЧ из латентной в активную форму, поэтому регулярный контроль активности ВГЧ-6 у ВИЧ-положительных пациентов важен для своевременного начала антивирусной терапии.

Сегодня активно исследуется возможная роль ВГЧ-6 в развитии рассеянного склероза, синдрома хронической усталости, лимфопролиферативных заболеваний.

Так как ВГЧ-6 в латентной форме распространен практически повсеместно, очень важно вовремя устанавливать характер его течения – активный/неактивный. Активация любой вирусной инфекции начинается с размножения (репликации) вируса в клетке-хозяине. Далее в большинстве случаев клетки-хозяева погибают, а новые вирусы выходят в межклеточное пространство (внутритканевую жидкость) для заражения новых клеток. Оттуда вирусные частицы попадают в различные биологические жидкости (кровь, мочу, ликвор) и железистые секреты, где могут быть легко обнаружены с помощью ПЦР. Выявление вирусных ДНК/РНК в бесклеточных образцах биологических жидкостей или железистых секретах является однозначным указанием на активную вирусную инфекцию. Однако диагностика инфекции осложняется тем, что ВГЧ-6 после репликации в клетке-хозяине заражает другие клетки напрямую, проникая через межклеточные перегородки и избегая межклеточных пространств. Таким образом, подтверждение активности ВГЧ-6 посредством ПЦР в бесклеточных образцах биологических жидкостей и секретах удается не во всех случаях. В связи с этим возникает необходимость подтверждения активности/неактивности ВГЧ-6 с помощью серологических методов.

Когда назначается исследование?

При дифференциальной диагностике детских инфекций, протекающих с высокой температурой и сыпью.
При диагностике инфекционного мононуклеоза при отрицательном тесте на вирус Эпштейна – Барр.
В комплексе обследований пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями и гемобластозами.
При обследовании реципиентов органов и тканей до и после трансплантации.
При диагностике вирус-ассоциированных заболеваний у ВИЧ-инфицированных и при других иммунодефицитных состояниях (например, синдроме хронической усталости).
При контроле за эффективностью проведенного антивирусного лечения.

Для чего используется исследование?

Для подтверждения наличия/отсутствия инфекции.
Для того чтобы определить характер течения инфекции – активный/неактивный.
Для дифференциальной диагностики герпетических инфекций.

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Причины положительного результата

Однократный положительный результат реал-тайм ПЦР однозначно свидетельствует об активной ВГЧ-6 инфекции.

Причины отрицательного результата

Однократный отрицательный результат реал-тайм ПЦР может быть признаком отсутствия активной ВГЧ-6-инфекции и нуждается в дополнительном подтверждении с помощью ретроспективных исследований вирусоспецифических IgG-антител.

Что может влиять на результат?

Свойство ВГЧ-6 поражать другие клетки напрямую, не выходя за их пределы, способствует ложноотрицательному результату.

Важные замечания

Лимфоциты и моноциты крови являются местом постоянного обитания и размножения ВГЧ-6 у инфицированных людей, поэтому надежным свидетельством активации/реактивации ВГЧ-6 служит обнаружение ДНК ВГЧ-6 в бесклеточных производных крови – сыворотке или бесклеточной плазме.

Также рекомендуется

Human Herpes Virus 6, IgG

Кто назначает исследование?

Аллерголог-иммунолог, акушер, гинеколог, инфекционист, педиатр, невролог, гематолог, хирург.

Литература

Nolan T, Hands RE, Bustin SA (2006). «Quantification of mRNA using real-time RT-PCR.». Nat. Protoc. 1: 1559-1582.
VanGuilder HD, Vrana KE, Freeman WM (2008). «Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis». Biotechniques 44: 619–626.
Salahuddin S.Z., Albashi D.V.,Markham P.D., et.al., (1986) Isolation of a new virus, HBLB, in patient with lymphoproliferative disorders. Science 234:596-601.
Asano Y., Yoshikawa T., Kajita Y et al.(1992) Fatal encephalitis/encephalopathy in primary human herpesvirus-6 infection. Arch. Dis. Child. 67:1484-1485.
Zhen Z, J Virol. 2005 Sep;79(18):11914-24.The human herpesvirus 6 G protein-coupled receptor homolog U51 positively regulates virus replication and enhances cell-cell fusion in vitro.
Gautheret-Dejean, A J Virol Methods. 2002 Feb;100(1-2):27-35. Development of a real-time polymerase chain reaction assay for the diagnosis of human herpesvirus-6 infection and application to bone marrow transplant patients.
Krueger GR, Ablashi DV, Josephs SF, Salahuddin SZ, Lembke U, Ramon A, Bertram G.Clinical indications and diagnostic techniques of human herpesvirus-6 (HHV-6) infection.n Vivo. 1991 May-Jun;5(3):287-95.
Yamanishi K., Okuno T., Shiraki K., et al. (1988) Identification of human herpesvirus-6 as casual agent for exanthem subitum. Lancet 1:1065-1067.
Preziozo P.J., Cangiarella J., Lee M., et al. (1992) Fatal disseminated infection with humanherpesvirus-6. J.Pediatrics 120:921-923.

Источник

Вирус герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) – ДНК–содержащий вирус семейства Herpesviridae подсемейства Betaherpesvirinae рода Roseolavirus. ВГЧ-6 был впервые выделен в 1986 г. из В-лимфоцитов периферической крови больных неходжкинскими лимфомами, которые возникают у больных ВИЧ-инфекцией. Вирус относится к подсемейству бета-герпес-вирусов, является ближайшим генетическим родственником ЦМВ, выделяют два варианта: ВГЧ-6А и ВГЧ-6В.

Репликация вируса в мононуклеарах периферической крови происходит относительно медленно и сопровождается лизисом клетки-хозяина. Для ВГЧ-6, как и для других герпес-вирусов, характерна способность к персистенции и латенции в организме инфицированного человека. Вирус проявляет тропизм к широкому спектру клеток хозяина: его обнаруживали в лимфатических узлах, лимфоцитах периферической крови, моноцитах, макрофагах, клетках почек, в слюнных железах, мозге. В момент острой инфекции возбудитель может быть выделен из крови. После заражения ВГЧ-6-инфекция приобретает латентное течение. Место латентного содержания вируса не изучено, предполагают, что вирус остается латентным на некоторое время в моноцитах и макрофагах. Вирус инфицирует слюнные железы и выделяется из них. Обнаружение вируса в крови характерно лишь во время фебрильной стадии внезапной экзантемы и, вероятно, при реактивации вируса и генерализации инфекции в условиях иммуносупрессии. Патогенез реактивации инфекции не ясен.

Инфекция ВГЧ-6 – антропоноз. Источник инфекции – человек, страдающий манифестной или латентной формой инфекции, а также вирусоносители. Пути передачи инфекции – воздушно-капельный, контактно-бытовой, парентеральный, трансплацентарный. Факторы передачи – слюна, мокрота, кровь. Инфекция отличается всеобщей восприимчивостью.

Читайте также: Герпес на фоне дерматита

Показана высокая патогенетическая значимость ВГЧ-6: он может вызывать острые поражения кожи у детей раннего возраста (внезапная экзантема новорожденных), лихорадку новорожденных с судорожным синдромом, синдром хронической усталости (в то же время последние работы придают большее значение в развитии данной патологии ВГЧ-7), мононуклеозоподобный синдром; у иммунокомпрометированных лиц – быть причиной лихорадки, пневмонии, гепатита, поражения ЦНС. Доказано, что вирус может выступать и в качестве кофактора ВИЧ. Наряду с возникновением первичной инфекции, возможна реактивация вируса: у детей, внутриутробно инфицированных ВИЧ-1, первичная ВГЧ-6-инфекция способствовала более быстрому развитию клинических проявлений уже в течение первого года жизни ребенка. Наличие активной ВГЧ-6 инфекции у ВИЧ-инфицированного ребенка, возможно, приводит к более быстрой прогрессии основного заболевания в течение 1-го года жизни. Описаны случаи пневмонии, энцефалита ВГЧ-6 этиологии у больных ВИЧ-инфекцией. ДНК ВГЧ-6 определяли в тканях головного мозга у погибших больных на стадии СПИДа. У больных ВИЧ-инфекцией при выраженной иммуносупрессии возможно поражение ВГЧ-6 ЦНС, легких и других органов, однако клиническая характеристика поражения отдельных органов, диагностическая чувствительность и специфичность различных лабораторных маркеров точно не охарактеризованы.

Верификация диагноза ВГЧ-6 инфекции осуществляется только при положительных результатах лабораторных исследований.

Дифференциальная диагностика. Энтеро- и аденовирусная инфекция, корь, краснуха, скарлатина, пневмония, средний отит, острый пиелонефрит, менингит, пневмококковая бактериемия, аллергические высыпания.

Показания к обследованию

Пятнисто-папулезная сыпь (экзантема) в сочетании с лимфаденопатией после непродолжительной лихорадки;
увеличение затылочных, заднешейных и/или околоушных лимфатических узлов;
исследование после контакта с больным внезапной экзантемой или другой инфекцией, вызванной ВГЧ-6 или с подозрением на данные нозологические формы;
дифференциальная диагностика экзантемных заболеваний;
иммунодефицитные состояния;
хроническая усталость и снижение работоспособности более чем на 50% с длительностью около 6 месяцев при отсутствии других заболеваний, вызывающих аналогичные признаки;
симптоматика врожденной инфекции, пороки развития у новорожденных.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление возбудителя в культуре клеток, обнаружение ДНК вируса, определение специфических АТ IgM, IgG к антигенам ВГЧ-6.

Материал для исследования

Плазма крови, СМЖ, лейкоцитарная фракция крови, слюна – выделение ДНК, выявление возбудителя в культуре клеток;
сыворотка крови – определение АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Выявление возбудителя в культуре клеток в настоящее время для рутинной диагностики инфекции, вызываемой вирусом ВГЧ-6, не применяются ввиду трудоемкости, длительности исполнения и необходимости определенных условий проведения исследований.

Основным методом дифференциальной диагностики инфекции является детектирование и определение концентрации ДНК ВГЧ-6 методом ПЦР. При исследовании цельной крови для диагностики инфекции предпочтительно количественное определение ДНК, которое позволит дифференцировать латентную и активную инфекцию, поскольку вирус может присутствовать в лейкоцитах здоровых лиц. Обнаружение ДНК вируса в плазме крови, но не в цельной крови подтверждает наличие активной инфекции. Результаты определения ДНК ВГЧ-6 в количественном формате позволяют провести динамическое наблюдение: на основании увеличения концентрации в периферической крови, лейкоцитах, СМЖ, слюне установить активность инфекционного процесса, выявить реактивацию, оценить эффективность проводимой терапии.

Для выявления специфических АТ IgM, IgG к АГ ВГЧ-6 используют преимущественно ИФА. Определение АТ IgG может быть выполнено в качественном и количественном формате. Обнаружение АТ IgM позволяет установить диагноз текущей первичной ВГЧ-6-инфекции, результаты определения АТ IgG в количественном формате – провести динамическое наблюдение, оценить состояние постинфекционного иммунитета к ВГЧ-6.

Показания к применению различных лабораторных исследований (герпес 6 типа – анализ). Индикаторами активной инфекции служат наличие ДНК ВГЧ-6 и АТ IgM. АТ IgM появляются в крови на 4–7 сутки от начала болезни и сохраняются в течение нескольких месяцев. АТ IgG появляются в крови на 7–10 сутки болезни и сохраняются в течение всей жизни, поэтому для установления факта первичного инфицирования необходимо количественное определение АТ IgG в динамике. Определение вирусоспецифических АТ IgG может быть использовано в скрининговых исследованиях для определения наличия иммунитета к ВГЧ-6.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Выявление специфического фрагмента ДНК ВГЧ-6 в образцах биоматериала пациента (плазма крови, СМЖ, соскобы со слизистой оболочки ротоглотки) позволяет при однократном тестировании подтвердить факт инфицирования ВГЧ 6 типа.

Обнаружение специфических АТ IgМ, маркеров острой фазы заболевания, свидетельствует о первичном инфицировании или реактивации инфекции. Однократное обнаружение АТ IgG не является однозначным свидетельством первичной инфекции.

Источник

Герпес 6 типа пцр количественный

Чем сводите бородавки?