Культуральное исследование на вирусы герпеса

Во время беременности при постановке на учет или при первичном появлении на теле специфической сыпи возникает необходимость сдать анализ на герпес.

Герпетическая инфекция отличается многообразием клинических проявлений. У человека встречается 8 типов вируса, каждый из которых имеет свой характерный комплекс симптомов.

Показания для сдачи анализов на герпес

Анализы на герпес в первую очередь назначают при планировании и в течение беременности. Данная инфекция относится к группе TORCH — это заболевания, которые могут передаваться от матери к плоду. Наиболее опасно для течения беременности первичное заражение. Поэтому будущей матери нужно регулярно сдавать анализы на обнаружение антител к возбудителям этой группы болезней на этапе планирования и на ранних сроках беременности. В обязательном порядке и как можно раньше такой анализ должен быть сдан женщиной, имеющей в анамнезе выкидыш или рождение ребенка с патологиями внутриутробного развития.

Если у одного из сексуальных партнеров диагностирован генитальный герпес, анализы сдаются для исключения или подтверждения инфицирования.

Поводом для сдачи анализов может стать нетипичное течение заболевания после инфицирования герпесвирусом. В данном случае отсутствуют те или иные классические симптомы болезни или присутствуют атипические варианты герпетической сыпи.

Такое заболевание, как опоясывающий лишай, имеет целый ряд атипичных форм течения, для подтверждения которых недостаточно клинического осмотра. В этом случае для постановки диагноза необходимо сдать анализы на вирус герпеса, в том числе и на вирус 3-го типа.

Лабораторные исследования на антитела к вирусу проводят у детей с признаками внутриутробного заражения, имеющими клинические признаки заболевания, в том числе и с подозрением на атипичное течение. В обязательном порядке обследуют детей, чьи матери перенесли острую форму болезни в течение беременности.

Тестируют на наличие вируса пациентов, в том числе и новорожденных, с признаками сепсиса, вирусного гепатита, менингоэнцефалита, пневмонии, а также с поражениями глаз или органов пищеварительной системы.

Обследование на наличие антител к вирусу обязательно для доноров и реципиентов перед трансплантацией органов или тканей.

Возможный материал для исследований

Для проведения микроскопии, культуральных исследований, для выявления антигенов возбудителя и его ДНК используют содержимое везикулярных элементов сыпи. Такой способ получения материала актуален для всех типов вируса, чье течение сопровождается сыпью (генитальный и герпес на губах, опоясывающий лишай, ветряная оспа).

Для диагностики ВПГ 2 и обнаружения его ДНК дополнительно делают соскоб или мазок-отпечаток со слизистой оболочки канала шейки матки, уретры. Для диагностики ВПГ 1 также отбирают слюну.

У новорожденных детей для подтверждения наличия в организме возбудителя генитального герпеса нужно взять соскоб эпителиоцитов с поверхности миндалин, кровь, мочу, спинномозговую жидкость и содержимое везикул.

Биоматериалом для анализа на герпес может быть любая биологическая жидкость

В качестве биоматериала для анализа на герпес могут использоваться практически любые биологические жидкости.

Антитела к вирусу выявляют в сыворотке крови или спинномозговой жидкости.

Современные лабораторные методы диагностики герпеса

Своевременное выявление активной стадии размножения вируса и адекватная противовирусная терапия позволяют избежать развития патологии плода при беременности, частых рецидивов герпетической инфекции или других осложнений. Так какие анализы сдают при герпесе и как правильно трактовать их результаты?

Культуральный метод

Вирусологические исследования, которые также называются культуральными, это методики нахождения и идентификации типа вируса простого герпеса из культур клеток тканей. Это один из самых чувствительных (до 80%) и специфических (100%) методов диагностики герпесвирусов. Материал, взятый у пациента, вносят в специальные флаконы с клеточной культурой тканей и наблюдают цитопатические изменения в клетках, характерные для того или иного типа возбудителя. Метод позволяет определить, какой именно тип герпеса стал причиной клинических проявлений болезни, его активность и чувствительность к противовирусным средствам.

Необходимость выращивания клеточных культур, длительность исследования от 1 до 8 дней и его стоимость — основные недостатки этого метода.

Полимеразная цепная реакция

Это наиболее чувствительный метод выявления ДНК или РНК вирионов возбудителя, способный обнаружить даже единичную молекулу нуклеиновой кислоты. Метод основан на выявлении и множественном последовательном копировании определенного фрагмента молекулы ДНК или РНК вируса с целью получения достаточного для идентификации количества копий. Благодаря генетической уникальности выбранного участка генома методика позволяет определить, какой именно вирус является возбудителем заболевания.

Читайте также: Мази при лечении герпеса

Сверхчувствительность данного исследования при неадекватной подготовке биоматериала может стать причиной того, что результаты анализа будут ложноположительными или ложноотрицательными. В этом случае необходимо провести повторные исследования.

Наличие генетического материала возбудителя в биоматериале не является подтверждением наличия патологического процесса, но свидетельствует об инфицировании герпесвирусом.

Этот метод с успехом применяют для скрининга на наличие герпетической инфекции у новорожденных из группы риска заражения ВПГ 1 и 2.

При подозрении на внутриутробное заражение методом ПЦР исследуют пуповинную кровь. Обнаружение ДНК вируса герпеса 1-го или 2-го типа в первые 48 часов после рождения позволяет подтвердить внутриутробное заражение плода после однократного тестирования.

Метод применяют для контроля эффективности противовирусной терапии. Для ВИЧ-инфицированных этот метод является наиболее информативным.

Результаты анализа интерпретируются так: наличие ДНК вируса является положительным результатом, ее отсутствие — отрицательным. Наличие генетического материала возбудителя свидетельствует о том, что вирус находится в активной стадии репликации.

Цитоморфология

Так называется выявление специфических гигантских клеток и включений внутри ядер клеток в окрашенных мазках из биоматериала посредством светового микроскопа. Это быстрый и дешевый способ, но его чувствительность составляет не более 60%. Кроме того, метод не позволяет определить, какой именно вирус является причиной патологии. Сдавать анализы для цитоморфологии имеет смысл только для постановки предварительного диагноза или подтверждения очевидной клинической картины.

С этой же целью можно использовать иммунофлюоресцентный анализ (РИФ) — мазки в данном случае окрашивают флюоресцирующей краской и просматривают под люминесцентным микроскопом. Результаты анализа считаются положительными при обнаружении 3 и более клеток эпителия с интенсивной флюоресценцией и типичными включениями в ядре или ядре и цитоплазме.

Серологические методы

Серологическими называются исследования сыворотки крови на присутствие специфических антител и антигенов. Эти методы не позволяют так точно диагностировать герпес как ПЦР или культуральное исследование. Тем не менее они широко применяются.

В настоящее время наиболее прогрессивным серологическим методом диагностики считается метод, который сокращенно называется ИФА — иммуноферментный анализ. Его чувствительность около 95%, а специфичность может достигать 100%. С его помощью можно обнаружить в сыворотке крови комплексные антитела IgА, IgG и IgM, наличие которых подтверждает факт инфицирования герпесвирусом. Иммуноглобулины к вирусу простого герпеса выявляют в 90% случаев даже при отсутствии клинической картины заболевания. В то же время рост титров антител, который свидетельствует об активном размножении или реактивации возбудителя, может наблюдаться только через несколько недель после заражения или не наблюдаться вообще, если больной страдает иммунодефицитом.

Культуральный анализ наиболее информативен

Культуральный анализ (посев) является наиболее чувствительным и информативным методом исследований.

Расшифровка анализа на герпес имеет некоторые особенности. Обнаружение вирусоспецифических антител класса М в сыворотке крови может быть признаком первичного заражения, реже — реинфекции или рецидива заболевания. Выявление иммуноглобулинов класса А может свидетельствовать об активном размножении возбудителя и затяжном течении острой фазы болезни. Признаком латентной инфекции является иммуноглобулин класса G.

Наличие у новорожденных в сыворотке крови IgM и IgА является основанием для постановки диагноза «неонатальный герпес».

У бессимптомных носителей анализ на герпес может выявить высокие титры иммуноглобулинов, в то время как у пациентов с выраженной клинической картиной уровень антител будет низким. Антитела класса М в большинстве случаев являются показателем активного размножения вирионов возбудителя, и в то же время они сохраняются в крови достаточно длительное время после заражения. Этот период может длиться несколько лет.

ИФА применяют для сравнительного анализа парных проб, полученных с интервалом 7-10 дней. Возрастание титров IgG во второй пробе в 4 раза по сравнению с первой является признаком первичного инфицирования.

Большинство тест-систем не позволяет определить, какой именно серотип вируса стал причиной заболевания.

Обнаружение в сыворотке крови и в других биологических средах антигенов к вирусу герпеса применяют в качестве экспресс-теста при мониторинге инфекции.

Источник

Вирусом герпеса заражено практически все население нашей планеты. Существует несколько видов герпеса, и если одни не особенно опасны, то другие могут создать серьезные проблемы со здоровьем, а в определенных ситуациях, например при беременности, последствия деятельности вируса могут стать фатальными.

Масштабы проблемы и роль диагностики герпеса

Герпес можно назвать самым распространенным вирусным заболеванием в мире. Заразиться им очень просто — он может передаваться при любых контактах (поцелуях, половом акте), во время родов от матери к ребенку, бытовым путем, иногда — воздушно-капельным. К моменту достижения взрослого возраста герпесом заражен практически каждый.

Попадая в кровь, вирус может жить в организме годами, никак не проявляя себя. Но рано или поздно он дожидается момента, когда наша иммунная система слабеет. Спусковым крючком может стать серьезная болезнь, стресс, переутомление и хроническая нехватка сна, переохлаждение, гормональная перестройка, словом, практически любая встряска для организма.

Проявления герпеса зависят от типа вируса.

Существует 8 типов герпеса:

Герпес 1-го типа. Самый распространенный тип. Именно он вызывает появление зудящих пузырьков, наполненных жидкостью, на губах, языке, слизистых оболочках рта. Иногда за несколько часов перед появлением пузырьков человек чувствует повышение температуры и слабость, хотя очень часто вирус атакует без предупреждения.

На заметку

Около 20% россиян отмечают возникновение пузырьков и язвочек на губах примерно 5–10 раз в году. В этом нет ничего удивительного, так как антитела к герпесу 1-го типа, свидетельствующие о присутствии вируса в организме, обнаруживаются у 99% обследованных.

Герпес 2-го типа. Приводит к появлению такой же пузырьковой сыпи, но на слизистых оболочках половых органов. Передается при сексуальных контактах. Этот вирус очень опасен для беременных и может приводить к патологиям плода.
Герпес 3-го типа. Его также называют вирусом ветряной оспы. Он вызывает ветрянку, которая характерна для детей, а также опоясывающий лишай. Сыпь возникает не на слизистых оболочках, а на коже и держится очень долго, около месяца. Сопровождается головными болями, общей слабостью, повышенной температурой.
Герпес 4-го типа, более известный как вирус Эпштейна-Барра. Характерные для герпеса пузырьки при этом заболевании располагаются на миндалинах, вирус провоцирует очень тяжелую ангину с высокой температурой, слабостью, сонливостью и выраженными болями в горле.
Герпес 5-го типа (цитомегаловирус). Этим типом герпеса инфицированы многие, но очень часто вирус «спит» и не вызывает никаких характерных симптомов. Однако в активном состоянии цитомегаловирус очень опасен, он вызывает тяжелые поражения внутренних органов. Если беременная женщина заражена герпесом 5-го типа, то велик риск выкидыша или преждевременных родов, а также патологий плода.
Герпес 6-го типа. Может приводить к развитию экземы, а также лимфосаркомы и лимфомы.
Герпес 7-го типа. Таинственный вирус, единственным явным проявлением которого является хроническая усталость, с которой не в силах справиться ни сон, ни отдых. Со временем развиваются проблемы с памятью и концентрацией внимания, человек становится раздражительным и апатичным, страдает иммунитет. Как правило, при таких симптомах люди не считают нужным обращаться к врачам и даже не подозревают, что синдром хронической усталости может быть вызван вирусной инфекцией.
Герпес 8-го типа. Довольно редкое и малоизученное заболевание, поражающее лимфоциты, чаще всего обнаруживается у ВИЧ-инфицированных и проявляется возникновением на коже мелких язвочек. Активизируется при развитии саркомы Капоши.

Важно

Герпес часто называют «простудой», но это неверно — вирус герпеса не имеет никакого отношения к возбудителям ОРЗ, и никакие средства от простуды, будь то антибиотики, жаропонижающие или какие-либо другие лекарства, при герпесе не помогут.

Многие считают, что избавиться от герпеса невозможно. И в этом утверждении есть доля истины — но лишь доля. Да, на сегодняшний день нельзя полностью уничтожить вирус в организме. Но можно подавить его деятельность настолько, что проявления не будут вас беспокоить. Лечение обычно комбинированное, используются противовирусные препараты, средства, укрепляющие иммунитет, используются также физиотерапевтические методы (озонотерапия и другие), а при обострении — местные обезболивающие и противовирусные средства.

Диагностировать и лечить герпес необходимо, и это особенно важно для тех, кто готовится стать родителями. Взрослым вирус герпеса причиняет дискомфорт, но для новорожденных детей он может быть смертельно опасным.

Этапы диагностики

Диагностика герпеса разделяется на два этапа — врачебный осмотр и лабораторные исследования, цель которых — найти и идентифицировать вирус герпеса в крови и других биоматериалах.

Зачастую уже при осмотре доктор в состоянии определить, с каким именно типом герпеса он имеет дело. Однако визуальные признаки могут ввести в заблуждение, например, генитальный герпес может походить на сифилис, а для некоторых типов герпеса внешние проявления вообще не характерны. Поэтому врач обязательно направит вас на анализы на герпес.

Лабораторные методы — основа диагностики герпеса. Они позволяют определить наличие вируса даже с том случае, если он неактивен, а также установить тип возбудителя и его концентрацию.

Когда могут быть назначены анализы

Анализы на герпес следует сдавать регулярно, даже если никаких проявлений болезни нет, — это нормальная мера контроля состояния здоровья. Но в некоторых случаях анализы на герпес обязательны.

во время планирования и ведения беременности;
перед подготовкой к трансплантации органов;
при появлении на коже пузырьков и высыпаний, причину которых сложно определить во время осмотра.

Методы лабораторной диагностики герпеса

Лабораторная диагностика герпеса включает в себя несколько видов анализов. Какой анализ на герпес необходим в каждом конкретном случае, решает лечащий врач. Иногда для полной уверенности потребуется пройти несколько разных исследований.

Классические методы

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

. Доступный и чрезвычайно простой метод, который позволяет быстро выявить вирус даже в том случае, если его концентрация в крови крайне мала. Методом ПЦР можно исследовать практически любой биоматериал. В основе ПЦР лежит метод многократного копирования части ДНК возбудителя болезни и последующей идентификации вируса и его типа.
Иммуноферментный анализ (ИФА)

. При помощи этого метода можно выявить наличие антител IgM и IgG (качественный ИФА) и подсчитать их концентрацию (количественный ИФА). При обострении высоко содержание IgM, а в хронической стадии — IgG. Таким образом, этот способ дает возможность установить фазу болезни.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

. При этом методе биоматериал обрабатывается особым веществом, под воздействием которого антигены начинают светиться и их можно быстро обнаружить при микроскопическом исследовании. Этот способ хорошо работает в том случае, если концентрация возбудителя в крови высока.

Дополнительные методы диагностики

Культуральный метод

. Точный и надежный метод, единственным существенным минусом которого является долгое ожидание результатов. При исследовании культуральным методом биоматериал переносится на питательную среду. Вирус начинает активно захватывать здоровые клетки и исследователь, наблюдая за их изменениями, получает возможность идентифицировать вирус. Ложноположительный или ложноотрицательный результат при использовании культурального метода почти исключен, но результата приходится ждать 1–2 недели.
Серологический метод

. Самый распространенный и доступный метод диагностики герпеса, определяющий антитела класса G. Часто назначают при подозрении на герпес 2-го типа (генитальный герпес). Биоматериалом для этого исследования является кровь из вены.
Иммунограмма

. Это не столько анализ на герпес или какой-либо другой вирус, сколько проверка работы иммунной системы. Специалист исследует кровь из вены и определяет общее количество иммунных клеток, а также их соотношение. Этот анализ позволяет определить, каких иммуноглобулинов не хватает. Иммунограмму назначают для подбора правильной терапии для стимуляции защитной системы организма.
Дот-гибридизация

. Метод, во многом похожий на ПЦР — он также направлен на выявление ДНК возбудителя. Способ диагностики можно использовать даже тогда, когда внешних проявлений болезни еще нет.
Вульвокольпоцервикоскопия

. Этот метод относится к качественным и применяется для диагностики генитального герпеса у женщин. Врач осматривает слизистые оболочки влагалища и шейки матки при помощи специального микроскопа — он дает не очень большое увеличение, однако этого достаточно для того, чтобы увидеть характерные для герпеса высыпания.

Сколько стоит анализ на герпес?

Стоимость анализов на герпес значительно различается в разных частных лабораториях Москвы, поэтому мы приводим средние расценки.

ПЦР-анализ обойдется примерно в 900–1500 рублей, если анализ проводится на все типы герпеса, и в 300–500 рублей, если анализ проводится на какой-то один тип. ИФА стоит в среднем 750–900 рублей, РИФ — 450–700 рублей.

К стоимости самого анализа нужно добавить и стоимость забора биоматериала — в среднем 200–300 рублей за забор крови и 300–400 рублей за забор мазка.

Традиционный список анализов при герпесе включает в себя ПЦР, ИФА и РИФ. Дополнительные исследования назначаются в том случае, если даже эти три метода в совокупности дали неоднозначный результат, что бывает достаточно редко.