Метод ифа и пцр герпес

Human alphaherpesvirus под кодовым названием HSV (в переводе с латинского вирус простого герпеса) относится к ДНК-содержащим вирусам.

HSV — большая семья из более чем 100 видов ДНК-вирусов, которые паразитируют на животных и людях, но только 8 из них вызывают заболевания у людей.

Наиболее распространенными являются вирус 1,2 и 6 типа.

Это самые загадочные и коварные вирусы, способные длительное время протекать в латентной форме, рецидивировать и заражать здоровых людей.

Поэтому диагностика герпеса остается актуальным вопросом.

Важно не только выявить герпетическое заболевание, но и его тип, что позволит подобрать наиболее эффективную тактику лечения и профилактики рецидивов.

Наиболее точным и информативным методом выявления герпесной инфекции остается ПЦР-анализ (полимеразная цепная реакция).

1 и 2 тип герпеса: ПЦР-исследование

Диагностические возможности, которые позволяют распознавать атипичные и бессимптомные клинические инфекции ВПГ, заключаются в применении полимеразной цепной реакции.

ПЦР признан наиболее точным и результативным методом в выявлении вирусов герпеса.

Получение микробиологических результатов ПЦР крови на герпес в короткие сроки возможно благодаря методам молекулярной биологии, основанным на обнаружении бактериальной ДНК.

Полимеразная реакция более чувствительна, чем стандартные методы, используемые в микробиологической диагностике, поэтому часто рекомендуется для выявления вирусов.

Реакция ПЦР включает в себя амплификацию выбранного фрагмента ДНК с использованием специфических праймеров.

Это позволяет обнаружить присутствие даже минимального количества вирусного ДНК.

Количественные методы ПЦР в реальном времени (RT-PCR) являются важным дополнением к качественным методам выявления инфекций герпетического характера.

Благодаря высокой достоверности результатов, глубокой автоматизации и низкой трудоемкости,

Методы молекулярной биологии, такие как ПЦР, успешно используются для выявления широкого спектра микроорганизмов, включая вирусы, бактерии, грибы и простейшие.

В отличие от методов разведения, они не требуют обнаружения роста микробов.

Молекулярные методы находят особое применение в диагностике патогенных микроорганизмов, которые трудно или невозможно выращивать in vitro.

ПЦР позволяет значительно сократить время ожидания результата и отличается высокой чувствительностью и специфичностью.

Особую актуальность ПЦР-анализ имеет при диагностике инфекции у беременной женщины.

ВПГ вызывают генитальные инфекции у беременных женщин и могут передаваться от инфицированных матерей к плоду и новорожденным.

У ребенка ВПГ может спровоцировать заболевания кожи, глаз, рта и центральной нервной системы.

Так, было установлено, что ВПГ-2 является причиной 15-30% инфекций плода и новорожденных.

Инфекции, вызванные герпесвирусами человека из-за их повсеместного распространения, представляют собой серьезную проблему для здоровья.

Социально-экономические проблемы и их последствия повлияли на динамику распространения инфекции, появление нового пути передачи и клинических симптомов.

Наиболее популярной клинической особенностью инфекции вируса простого герпеса типа 1 (ВПГ-1) является оролабиальная инфекция.

Но наиболее важной проблемой является генитальный герпес (ВПГ-2).

Из-за таких осложнений, как заражение другими заболеваниями, передаваемыми половым путем, инфекция плода (герпес новорожденных).

Почему герпетическая инфекция является настолько распространенной и легко передаваемой?

Многие инфицированные герпесом люди страдают от бессимптомной болезни, но периодически выделяют вирус в слюну или генитальные выделения.

У некоторых приобретение первичного генитального герпеса может вызывать болезненные язвенные поражения и системные проявления.

Включая головную боль, недомогание и лихорадку продолжительностью до 3 недель.

После начальной половой инфекции ВПГ становится латентным в крестцово-нервных ганглиях и может активизироваться, вызывая периодические поражения половых органов.

Хотя рецидивирующие эпизоды короче и более локализованы, чем первые, хроническая природа этого заболевания и возникновение рецидивов могут приводить к серьезным осложнениям.

Передача вируса возможна во время симптоматической инфекции у полового партнера, но большинство заражений происходит во время бессимптомного эпизода.

Как проводится диагностика ПЦР 1 и 2 типа герпеса

Исследуемым материалом является венозная кровь, также для диагностики герпеса методом ПЦР берется урогенитальный мазок.

У мужчин забор материала проводится специальным инструментом со стенок мочеиспускательного канала, у женщин со слизистой влагалища и шейки матки.

Перед проведением ПЦР на герпес 1 и 2 типа рекомендуется придерживаться некоторых правил, что позволит получить максимально точные результаты.

Женщинам за несколько дней нужно исключить половые контакты, использование вагинальных свечей и спринцеваний.

За 2-3 часа исключить мочеиспускание.

Мужчинам также рекомендуется не мочиться за несколько часов до анализа.

Интерпретировать результаты можно следующим образом:

• Положительный ПЦР герпес — ДНК возбудителя присутствует.
• Отрицательный герпес ПЦР — ДНК возбудителя отсутствует.

ПЦР на герпес 6 типа

Герпесвирус человека 6 (HHV-6) представляет собой набор из двух близкородственных вирусов герпеса, известных как HHV-6A и HHV-6B.

HHV-6B инфицирует почти 95% людей, как правило, в возрасте до трех лет и зачастую проявляется сыпью — розовой эритемой, известной как розеола.

Относительно HHV-6A, то мало что известно о распространенности вируса или о том, как он приобретается.

Но одно небольшое исследование выявило очень низкие уровни 6А у половины исследуемых здоровых людей.

Главные пути инфицирования — передача через слюну и воздушно-капельным путем.

Как и другие герпесвирусы, HHV-6 устанавливает латентность в течение всей жизни и может реактивироваться на фоне благоприятных факторов, зачастую — это снижение иммунитета.

У взрослых инфекция HHV-6 обычно возникает в форме лимфаденопатии, иногда в тяжелой форме, сопровождающейся лихорадкой и нарушением функции печени.

После заражения вирус остается бездействующим в слюнных железах и мононуклеарных клетках периферической крови, но может быть реактивирован в условиях иммуносупрессии хозяина.

Герпесвирус человека 6 типа диагностируется с помощью полимеразной реакции, биологическим материалом являются: 

• Венозная кровь
• Спинномозговая жидкость
• Слюна
• Урогенитальный мазок/соскоб (шейка матки, влагалище)
• Соскоб мочеиспускательного канала
• Эндометриозный биоптат

Кроме того, материалом для анализа ПЦР на герпес является соскоб с поверхности половых органов.

Как подготовиться к анализам на герпес

Точность результата также зависит от подготовки пациента к анализу.

Для исключения получения ложноположительного или ложноотрицательного результата необходимо проводить забор биологического материала на голодный желудок.

Последний прием пищи должен быть за 8-10 часов до посещения врача.

Также за сутки следует исключить любые местные процедуры.

Это спринцевания, использование влагалищных суппозиториев, инстилляции уретры, антисептическую обработку горла, полости рта и др.

Основными показаниями к назначению диагностики шестого типа герпеса являются:

• Высыпания на коже, появившиеся после короткого периода лихорадки.
• Увеличение лимфатических узлов в области шеи и ушей.
• Признаки герпетиформного дерматита.
• Как дифференциальный анализ инфекционно-воспалительных патологий кожных покров.
• В качестве скрининговых тестов при иммунодефицитном состоянии у пациента.

Вирусы герпеса, включая HHV-6, HHV-7 и HHV-8, могут вызывать внутриутробные инфекции у плода в перинатальном периоде и вызывать заболевания у новорожденных.

HHV-6 может встраивать свою ДНК в геном матери и, таким образом, вызывать врожденные инфекции, которые встречаются примерно у 1% детей, но протекают бессимптомно.

Поэтому своевременная диагностика и лечение герпеса является важным этапом планирования беременности.

ПЦР-диагностика Herpes zoster

Опоясывающий лишай или герпес зостер является вирусным заболеванием и встречается только у людей, у которых ранее была ветряная оспа.

Этиологическим фактором является Human herpesvirus 3 типа.

После того, как инфекция ликвидирована, вирус не выводится из организма пациента, а остается в состоянии покоя в нервных клетках.

В ситуации значительного снижения иммунитета вирус реактивируется и развивается опоясывающий лишай со своими характерными симптомами.

Появляется зудящая сыпь, идентичная оспе, а также папулы, везикулы, заполненные серозным содержимым.

ПЦР на присутствие герпес зостер состоит в обнаружении ДНК Human herpesvirus 3 в различных типах материала, взятого у пациента.

Материалом для исследования могут служить: цельная кровь, плазма, сыворотка, спинномозговая жидкость, урогенитальный мазок.

Особую ценность анализ представляет для женщин, планирующих беременность или уже ожидающих ребенка.

При первичном заражении вирусом в период беременности существует огромный риск спонтанного прерывания беременности (на ранних сроках) и развития внутриутробных патологий плода.

Контрольный ПЦР анализ на герпес после лечения

После прохождения курса терапии противовирусными препаратами, проводится повторная сдача анализа с целью мониторинга эффективности лечения.

Повторный ПЦР назначается спустя 14-20 дней после завершения терапевтического курса.

Результаты диагностики могут быть предоставлены в двух вариантах.

Пациент может получить положительный либо отрицательный вариант анализа.

В первом случае будет идти речь о наличии следов инфекции в организме человека на данный момент.

Здесь можно сделать вывод, что медикаментозное лечение было проведено некорректно или требуется повторный курс приема препаратов.

Отрицательный результат говорит об успешном лечении и отсутствии следов инфекции в организме.

ИФА или ПЦР на герпес: какой анализ лучше?

Для того чтобы понять, какой анализ лучше будет для выявления герпетической инфекции, следует понимать специфику работы данных лабораторных методов.

ИФА — иммуноферментный анализ, представляет собой широко используемый лабораторный метод, который назначается для количественного определения антител в крови.

ELISA (ИФА) основана на обнаружении в биологическом материале иммунных белков — антител, которые возникают при ответных реакциях против антигенов герпетической инфекции.

Антитела тестируются в двух классах, IgM и IgG. IgM — это первые элементы, которые появляются в организме после контакта с герпетической инфекцией и со временем могут исчезать.

Интерпретировать результаты анализа поможет врач, обычно в заключении можно видеть такие сведения:

• Наличие иммуноглобулинов М (IgM). Выполняет функцию самого раннего иммуноглобулина, вырабатываемого в ходе иммунного ответа. При наличии IgM в организме отмечается острый инфекционный процесс. А его отсутствие может быть признаком как хронической инфекции герпеса, так не выявленного патогена.
• Наличие иммуноглобулина A (IgA). В сыворотке крови он составляет около 15% всех иммуноглобулинов. Он синтезируется плазматическими клетками, лежащими в основе эпителия. Является маркером оценки состояния иммунной системы местного типа.
• Наличие иммуноглобулин G (IgG). Представляет собой гликопротеин, продуцируемый В-лимфоцитами или плазматическими клетками после контакта с антигеном. IgG — антитела, которые действуют главным образом против вирусов и бактерий. Присутствие IgG в биологическом материале будет говорить о выздоровление или перехода инфекционного процесса в хроническую форму.

В ряде случаев можно получить и другие результаты, такие как:

• Ложноположительные результаты являются результатом перекрестной реактивности большинства антител IgM с другими белками.
• Ложноотрицательные результаты могут появиться на ранних стадиях инфекции, после чего тест следует повторить примерно через 3-4 недели. Это называется серологическое окно, которое является начальным периодом инфекции, при котором организм еще не «выработал» специфические антитела.

ПЦР — молекулярная диагностика с использованием метода полимеразной цепной реакции, включает дублирование определенного фрагмента генетического материала (ДНК или РНК).

Таким образом, можно выявить конкретный тип возбудителя.

Эта методика позволяет с высокой чувствительностью и точностью подтвердить или исключить присутствие патогенных возбудителей в тестируемом образце.

Это особенно важно в диагностике микроорганизмов, где традиционные методы исследований не показывают нужную информативность, как в случае вирусных заболеваний.

Диагностическая чувствительность теста при диагностике герпесной инфекции составляет более 95% на момент появления клинических симптомов.

При диагностике неонатальных патологий тест показывает диагностическую чувствительность 85-100% и специфичность 70-99%.

Какой именно анализ выбрать для диагностики герпеса подскажет лечащий врач.

Как правило, ПЦР назначается непосредственно для обнаружения патогенного микроорганизма, а ИФА в качестве мониторинга эффективности лечения.

После прохождения терапии по рекомендации доктора могут быть назначены оба варианта тестирования.

Когда и как лечить герпес, если ПЦР положительный?

При положительных результатах ПЦР лечение назначается даже при отсутствии выраженной клинической картины, особенно, если женщина планирует беременность.

Тактика лечения разрабатывается в зависимости от типа герпетической инфекции и осложнений, к которым привело заболевание.

Общая терапия заключается в назначение протиововирусных препаратов: 

• Ацикловир (Зовиракс)
• Валацикловир (Валтрекс)
• Фамцикловир (Фамвир)
• Пенцикловир (Денавир)

Некоторые из этих препаратов выпускаются в форме таблеток для перорального использования.

Также существуют формы средств в виде крема для нанесения на язвы, герпетические раны.

В случае очень серьезных инфекций противовирусные препараты могут применяться путем инъекционного введения.

Для диагностики и лечения герпеса обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.