Пцр диагностика на хламидии микоплазму уреаплазму цитомегаловирус герпес

Уреаплазмозом называют воспалительно-инфекционный процесс в органах мочеполовой системы, вызываемый таким микроорганизмом, как уреаплазма.

Некоторое время считалось, что уреаплазма не патогенна для организма и чуть ли не все люди являются ее носителями.

Однако последние исследования убедительно продемонстрировали не 100-процентную распространенность микроба.

Также выявили его негативную роль в ряде патологических состояний организма хозяина.

Передаваться уреаплазма может как при сексуальном контакте, так и в результате инфицирования новорожденного матерью, а также при пересадке органов.

После попадания возбудителя в человеческий организм возможны:

• самоизлечение (временное носительство), когда уреаплазма спустя некоторое время перестает выявляться лабораторными методами;
• стойкое носительство, при котором микроорганизм обнаруживается, но никаких патологий не провоцирует;
• развитие инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта – уретрита, цервицита и других.

Кроме того, весьма серьезной проблемой, ассоциируемой с уреаплазмозом, является его негативное воздействие на протекание беременности.

Так, инфекция может вызывать преждевременные роды, рождение маловесного ребенка, проявление у плода различных патологий, сепсиса, бронхолегочных нарушений, проблем с ЦНС.

Поэтому при уреаплазмозе на фоне беременности или на стадии планирования последней врачи настоятельно рекомендуют проводить лечение.

Все известные представители уреаплазм разделены на 14 серотипов, при этом 1й, 3й, 6й и 14й относят к группе Ureaplasma parvum, а остальные к Ureaplasma urealyticum.

Независимо от типа или группы уреаплазма может как долго проживать без активного влияния на организм, так и провоцировать некоторые заболевания.

Даже предполагалось, что уреаплазма парвум «отвечает» за проблемы урогенитальной сферы у женщин и патологии новорожденных.

А уреаплазма уреалитикум – причина негонококковых уретритов у мужчин.

Но такая гипотеза не нашла пока убедительного подтверждения, хотя определенные исследования продолжаются.

В связи с этим диагностика уреаплазмоза предполагает выявление не какого-то конкретного типа возбудителя, а уреаплазмы вообще, Ureaplasma species (sp.).

Основным методом лечения уреаплазмоза является антибиотикотерапия.

Но при этом есть данные, что некоторые представители группы Ureaplasma parvum устойчивы к определенным препаратам.

В результате диагностика уреаплазмоза у женщин и у мужчин может потребовать определения антибиотикочувствительности возбудителя.

В терапии предпочтительно используются макролидный антибиотик кларитромицин (10-тидневный курс), фторхинолоны – офлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин.

Диагностика уреаплазмоза после лечения проводится обычно спустя месяц методом ПЦР или через две недели при культуральном исследовании.

В случае применения антибиотиков срок контроля может составлять 3 недели, при использовании бактериостатических препаратов контроль излеченности можно осуществлять спустя два жизненных срока уреаплазм (6 недель).

Основные методы диагностики уреаплазмоза

Назначить проведение анализов на уреаплазмоз может лечащий врач на основании имеющихся симптомов.

Врач-гинеколог при постановке на учет беременной, венеролог, уролог, инфекционист при наличии соответствующих подозрений и др.

Как правило, обнаружение уреаплазмы осуществляют следующими методами:

• иммуноферментным анализом
• иммунофлуоресценцией прямой/непрямой
• бактериологическим посевом
• полимеразной цепной реакцией

Хотя ряд исследований демонстрирует наибольшую диагностическую ценность метода ПЦР, остальные исследования также могут находить применение.

Иммуноферментный анализ в диагностике уреаплазмоза

При проникновении патогенного возбудителя в организм последний начинает вырабатывать иммуноглобулины, иначе антитела, – специальные защитные вещества белковой природы.

Первыми появляются и относительно быстро исчезают белки класса IgM, их обнаружение свидетельствует об острой фазе развития болезни.

Несколько позже появляются IgG, сохраняющиеся в крови продолжительное время, — маркеры перенесенного заболевания.

Иммуноглобулины IgA также появляются не сразу, а примерно спустя неделю от момента инфицирования, и их количество постепенно снижается после удаления возбудителя из организма.

Анализ крови на иммуноглобулины (серологическое исследование) используется в диагностике уреаплазмоза.

Он позволяет в некоторых случаях оценить стадию инфекционного процесса.

Одним из таких исследовательских методов является иммуноферментный анализ, иначе ИФА.

Важно понимать, что обнаружение антител не подтверждает гарантированно наличие инфекции.

А просто демонстрирует борьбу организма (проходящую в настоящем или реализовавшуюся в прошлом).

Возбудители инфекционных заболеваний содержат характерные компоненты – антигены, с которыми и связываются вырабатываемые организмом антитела.

Подобное взаимодействие высокоизбирательно и специфично, что позволяет использовать его в множестве иммунологических исследований.

В ИФА к антителам присоединяют ферментную метку.

При образовании комплекса «антитело-антиген» ферментная активность изменяется/появляется, что можно легко отслеживать.

Например, по интенсивности окраски раствора (раствор содержит хромоген, превращающийся под действием фермента в окрашенное вещество).

Иммунофлюоресцентный анализ в диагностике уреаплазмоза

Реакции иммунофлюоресценции также относятся к иммунологическим методам, использующим специфичность взаимодействия антигенов с антителами.

Методы прямой и непрямой иммунофлуоресценции применяются для выявления антигенов возбудителей. 

При прямом методе (РПИФ) используются специфические антитела с флюорохромной меткой, а оценка результатов проводится по интенсивности итогового свечения.

В непрямом методе метку содержат видоспецифические иммуноглобулины (активные против антител).

В общем случае серологическая диагностика уреаплазм довольно затруднительна из-за большого числа серотипов этих микроорганизмов.

Кроме этого, антитела могут обнаруживаться и у здоровых людей, тогда как не у всех инфицированных антитела образуются.

Вот почему подобные методы диагностики используются чаще в острых случаях.

Например, при послеродовых осложнениях, бесплодии, невынашиваемости беременности, хориоамнионите (инфекционном воспалении оболочек плода и амниотической жидкости).

В рутинной диагностике уреаплазмоза серологические меодики не рекомендуются к использованию.

Диагностика уреаплазмоза: посев культуральный

Бактериологический посев, или микробиологическое/культуральное исследование, ограниченно используется в диагностике уреаплазмоза.

Метод представляет собой исследование, при котором биологический материал помещается в особую среду, питательную для уреаплазмы при благоприятствующих ее развитию условиях.

Методика отличается от традиционной, основанной только на микроскопической оценке роста колонии микроорганизмов.

При выявлении уреаплазм используется определение гидролиза мочевины (мочевина содержится в питательной среде, а уреаплазмы отличаются способностью к гидролитическому разрушению такого вещества до аммиака и углекислого газа).

В зависимости от показаний у женщин берется на посев уреаплазмы мазок из маточной шейки, вагины, мочеиспускательного канала, у мужчин – из уретры.

После высевания материала результат оценивается спустя несколько дней.

При наличии роста уреаплазм определяется их чувствительность к антибиотикам (доксициклину, офлоксацину, кларитромицину и пр.).

В то же время некоторые исследователи подвергают сомнению целесообразность изучения антибиотикоустойчивости уреаплазм.

Дело в том, что чувствительность бактерий «в пробирке» отличается от таковой в организме.

Различается так называемая биодоступность – способность лекарств проникать в очаг поражения.

Для оценки предполагаемой эффективности терапии важна концентрация препарата, выраженная в минимально ингибирующих единицах, активная непосредственно в организме.

Методов ее определения не существует.

В итоге не всегда чувствительность к антибиотикам, установленная в пробирке, соответствует реальной.

Диагностика уреаплазмоза: ПЦР

Метод полимеразной цепной реакции является достоверно самым чувствительным, быстрым и относительно недорогим методом выявления инфицирования уреаплазмой.

ПЦР позволяет многократно скопировать определенный участок ДНК любого микроорганизма и тем самым увеличить количество до диагностически адекватных величин.

Подтвердить или исключить наличие уреаплазм в результате становится возможно визуально (методом электрофреза) в сравнении с контрольным образцом.

ДНК специфична для любого живого организма.

Поэтому обнаружение, например, ДНК уреаплазмы уреалитикум методом ПЦР в соскобе достоверно подтверждает наличие и самого микроорганизма.

В то же время необходимость определения уреаплазм (уреалитикум, парвум) методом ПЦР количественным в соскобе эпителия половых органов является сомнительным.

Дело в том, что уреаплазмы очень прочно связываются с эпителиальными клетками и населяют слизистую урогенитального тракта весьма неравномерно, практически отсутствуя в выделениях.

У женщин количество влагалищного эпителия определяется фазой менструального цикла.

Соответственно меняется количество питательного для уреаплазм гликогена, а значит непостоянно и число самих микроорганизмов.

В результате количество микробов в образце может не соответствовать реальной картине.

На ПЦР (уреаплазма) соскоб со стенок влагалища, цервикального и/или мочеиспускательного канала берется примерно на 7й-10й день после предполагаемого заражения при отсутствии симптомов.

В те же сроки при подозрении на уреаплазмоз берут мазок со стенок глотки, ануса после оральных и анальных сексуальных контактов.

Эффективность ПЦР объясняет тот факт, что при выборе аналитического метода в пользу исследования крови или мазка на уреаплазму, врачи склоняются к последнему.

Дополнительные методы диагностики уреаплазмоза

Отрицательный результат ПЦР – практически 100%-ная гарантия отсутствия возбудителя.

А вот положительный результат ПЦР анализа мазка на уреаплазму не всегда означает наличия собственно заболевания – уреаплазмоза.

Поэтому диагностика уреаплазмоза по мазкам предполагает проведение ряда дополнительных исследований, что особенно важно в ситуации с болезнями бессимптомного течения.

В целом если пациент предъявляет жалобы на какие-либо проблемы со стороны урогенитального тракта, а в анализах выявляется только уреаплазма, то в такой ситуации может устанавливаться диагноз «уреаплазмоз» без дополнительных исследований.

При отсутствии проявлений на фоне обнаружения уреаплазмы необходимо исключить воспалительный процесс.

Для этого применяются следующие диагностические методы:

У мужчин:

• осмотр половых органов
• пальпация мошонки
• ректальное исследование простаты, пузырьков семенных
• мазок (не на уреаплазму, а на воспалительные изменения и иные микроорганизмы) с микроскопическим исследованием
• микроскопия простатического секрета
• спермограмма
• анализ мочи (двухстаканная проба)
• УЗИ простаты и мошонки

У женщин:

• гинекологический осмотр с исследованием матки и придатков
• мазок из уретры, шеечного канала, влагалища (не на уреаплазму, а на воспалительные изменения и иные микроорганизмы) с микроскопическим исследованием
• микроскопия мочевого осадка
• УЗИ матки с придатками
• лапароскопическое исследование при необходимости

Если в результате исследований патологические изменения не были обнаружены, а уреаплазмы выявлены, то такое состояние оценивается как уреаплазмопозитивность.

Лечение при этом рекомендуется только в определенных ситуациях, например, когда мазок на уреаплазму сдавался при беременности или ее планировании.

Если имеются клинические и/или лабораторные признаки воспаления в области урогенитального тракта, а патогенных возбудителей не обнаружено?

Это однозначное показание к обследованию (мазок) на микоплазму или/и уреаплазму.

Сдать мазок на уреаплазму необходимо и тем, кто:

• столкнулся с проблемой невынашиваемости беременности, гибелью плода
• имеет диагноз бесплодие
• планирует стать донором спермы

Важно понимать при постановке диагноза, что симптомы уреаплазмоза не специфичны.

Они схожи с таковыми при инфицировании иными микроорганизмами (хламидиями, микоплазмами, гонококками и пр.).

Критерии воспалительного процесса:

• уретрит у мужчин подтверждается обнаружением 5-ти и более лейкоцитов в уретральном отделяемом, 10-ти и более лейкоцитов в первой порции мочи, у женщин соответствующие пороговое значение составляет в уретральном отделяемом 10 лейкоцитов
• вагинит диагностируется при обнаружении 15-20-ти и более лейкоцитов во влагалищном отделяемом при их соотношении с клетками плоского эпителия 1:1
• цервицит подтверждается обнаружением 10 и более лейкоцитов в отделяемом канала шейки матки и наличием гнойно-слизистых выделений

Распространенные вопросы о диагностике уреаплазмоза

Откуда берут мазок на уреаплазму и для иных сопутствующих лабораторных исследований?

У женщин соскоб на уреаплазму берется из влагалища, уретры, цервикального канала, также исследуются, при наличии, выделения их этих органов, первая порция мочи.

У мужчин на уреаплазму исследуется соскоб или отделяемое уретры, также изучается первая мочевая порция.

У женщин, не имевших половых контактов, детей анализируются выделения из мочеиспускательного канала, берется мазок на уреаплазму с влагалища, задней ямки влагалищного преддверия.

С помощью детских гинекологических зеркал – и отделяемое с шейки матки.

• Как берут мазок на уреаплазму?

Взятие образца для бактериологического исследования осуществляется вагинальными тампонами и бактериологическими петлями, для исследования методом ПЦР – тампонами и специальными зондами.

У женщин забор материала производится в процессе гинекологического осмотра с зеркалами.

То, как берут мазок у мужчин на уреаплазму, зависит от вида исследования.

Обычно образец собирается с глубины примерно в 3 см от наружного края уретры.

При необходимости предварительно проводится массаж предстательной железы.

При заборе материала из уретры ее наружное отверстие обрабатывают стерильным физраствором.

Если имеются выделения, соскоб берут или спустя 20 минут после мочеиспускания, или сразу.

Иногда рекомендуется проводить массаж уретры зондом.

У женщин забор материала производится с глубины примерно 1 – 1,5 см вращательным движением.

У детей материал берется только с наружного отверстия.

Хотя важно, чтобы полученный образец не содержал примесей крови, после процедуры из-за механического травмирования слизистой мочеиспускательного канала некоторое время могут наблюдаться проявления легкого уретрита.

У женщин из влагалища образец берется с заднего свода, «подозрительных» участков слизистой.

Из шейки матки забор реализуется с глубины 0,5 – 1,5 см, а также с границы эрозивных изменений.

Важно, чтобы зонд не касался стенок влагалища в процессе извлечения.

При подозрении на простатит у мужчин может исследоваться и моча: 1-ю, 2-ю порции получают при самопроизвольном мочеиспускании, 3-ю – после массажа простаты.

Секрет простаты для анализа объемом около 1 мл также получают с помощью массажа.

Если не удается собрать образец, исследуется первая порция мочи после манипуляции.

• Как подготовиться к такому исследованию на уреаплазмоз, как мазок?

Чтобы результаты были максимально достоверны, следует придерживаться определенных правил подготовки к сдаче анализа:

• у женщин забор материала осуществляется вне менструации и после воздержания от половых контактов
• материал из уретры берут спустя 3-4 часа после мочеиспускания
• в день анализа женщины должны отказаться от туалета половых органов, спринцеваний
• примерно за неделю до исследования прекращается прием лекарственных препаратов, прохождение медицинских процедур (после согласования с доктором!)

Применение популярных ранее методов провокаций посредством употребления определенной пищи, биологических, химических и иных процедур на сегодняшний день считается нецелесообразным.

Сколько ждать результата мазков на уреаплазму?

Наиболее оперативно получить результат можно с помощью ПЦР-исследования: в течение одного рабочего дня, причем собственно исследование занимает около 5-ти часов.

Исследование методом культурального посева может потребовать нескольких дней (обычно около трех суток).

До 4-х дней занимает получение результата определения антител к уреаплазме.

Что делать, если обнаружен уреаплазмоз?

При обнаружении уреаплазмы лечение проводится в случае:

• обусловленного ими негонококкового уретрита у мужчин
• системных инфекций, таких как сепсис, менингит, и легочных патологий у лиц с иммунодефицитными состояниями и у новорожденных

Рекомендуется терапия при подготовке к беременности, а также женщинам, половые партнеры которых имеют проблемы с уретритом.

Во всех перечисленных ситуациях не требуется предварительная количественная оценка, достаточно факта самого наличия уреаплазм.

Диагностика уреаплазмоза, назначение и интерпретация результатов исследования – сфера деятельности медицинского специалиста: врача-уролога, гинеколога, инфекциониста, венеролога.

Только доктор может адекватно оценить общую картину состояния пациента, определить необходимость терапии и подобрать оптимальный вариант лечения.

Для диагностики уреаплазмоза обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.