Предранние белки вируса герпеса
Герпес — это одно из наиболее распространенных вирусных заболеваний на планете. По данным статистики, не менее 90% населения является носителями этого вируса. Клинические признаки отличаются при разных типах герпеса, болезнь может проявляться на коже и слизистых оболочках. Анализ крови на герпес 1 и 2 типа и расшифровка данных — это способ выявить возбудителя, определить его тип и выбрать подходящую схему лечения.
Что представляет собой возбудитель?
Возбудитель герпеса — это ДНК-содержащий вирус. Чаще всего он поражает кожу лица, слизистые оболочки глаз, половых органов, реже — ткани нервной системы и внутренние органы.
Заражение может происходить одним из следующих способов:
- контактным (в том числе при использовании общих предметов быта и личной гигиены);
- воздушно-капельным;
- половым;
- вертикальным (от матери к ребенку при беременности и в процессе родов).
После проникновения в организм вирус может не проявляться клинически в течение длительного времени. Иммунная система человека держит популяцию возбудителя под контролем, и он не способен размножаться. Первые симптомы возникают при снижении уровня иммунной защиты, в том числе при сезонных иммунодефицитах. Поэтому герпес часто сопровождает другие вирусные и бактериальные заболевания, грибковые инфекции.
Больной может не знать, что является вирусоносителем, но при этом заражать окружающих.
Герпесвирус 1 типа
Вирус простого герпеса первого типа — это самый распространенный возбудитель. Он проникает в организм человека еще в детском возрасте и дает периодические рецидивы.
Чаще всего болезнь локализуется на коже лица и тела и проявляется следующими симптомами:
- покраснение кожи в месте активизации вируса;
- появление мелкой сыпи (пузырьки вскрываются самостоятельно, а на их месте образуются язвы);
- зуд и отечность.
Заболевание проявляется локально, но некоторые пациенты жалуются также на повышение температуры, озноб, слабость и мышечную боль. В период рецидива герпеса больной максимально опасен для окружающих, так как возбудитель находится в содержимом пузырьков.
Герпесвирус 2 типа
Герпес второго типа относят к заболеваниям, передающимся половым путем. Кроме того, существуют еще контактный, бытовой и вертикальный пути передачи. Клинически болезнь проявляется сыпью на половых органах и коже бедер. Исследования на герпесвирус обязательны при беременности. Вирус опасен для плода: существует риск развития патологий, а также инфицирования младенца во время родов.
В каких случаях нужно обращаться в лабораторию?
Во время рецидива болезни вирус герпеса 1 и 2 типа можно определить путем простого осмотра. Характерная зудящая сыпь, которая имеет определенную локализацию, — это единственный признак, который будет являться основанием для постановки диагноза. Кроме того, пузырьки часто появляются на одном и том же месте, с одинаковой стороны.
Сдавать кровь в лабораторию для анализа нужно только в нескольких случаях:
- если герпес проявляется нестандартно, в стертой форме или с осложнениями;
- во время планирования беременности;
- если нужно выяснить срок заражения (например, при беременности для оценки потенциального риска для плода).
Сыпь может служить признаком большого количества заболеваний инфекционного и незаразного происхождения. По данным анализа крови можно определить тип вируса, убедиться в диагнозе и назначить лечение по необходимости.
Методы определения вируса герпеса в крови
Существует несколько методик обнаружения герпесвируса в крови. Они эффективны при спорных ситуациях, а также в тех случаях, если болезнь протекает бессимптомно. Во время рецидива можно также исследовать содержимое пузырьков, соскобы кожи или мазки слизистых оболочек. Лечащий врач определит, какие анализы нужно сдать, исходя из возможностей лаборатории и финансового положения пациента.
Существует несколько стандартных правил, которые позволят получить наиболее точный результат. Анализы сдают на голодный желудок. Чаще всего кровь собирают утром, с 8 до 10 часов. Накануне не стоит употреблять жирную пищу и алкоголь. Также на результат анализов могут повлиять стрессы или любое другое эмоциональное перенапряжение.
Анализ на герпес 1 и 2 типа чаще всего проводят двумя методами — ПЦР (полимеразная цепная реакция) и ИФА (иммуноферментный анализ). Также могут использоваться другие способы, в зависимости от оснащения лаборатории и ее технических возможностей.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
ПЦР — это чувствительная реакция, которая позволяет обнаружить в исследуемом материале ДНК вирусных клеток. Суть метода сводится к тому, что определенный ген многократно копируют, в результате чего можно выявить наличие и тип возбудителя. Важно, что реакция не произойдет, если исследуемой ДНК в материале нет.
Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить вирус непосредственно после заражения, задолго до того, как болезнь начнет проявляться клинически. Также ее назначают в тех случаях, когда нужно определить конкретный тип вируса, а не просто его наличие.
Лаборатория предоставляет бланки с показателями, которые легко расшифровать самостоятельно. Положительный результат свидетельствует о присутствии вируса в крови, отрицательный — об отсутствии. Это наиболее достоверный и чувствительный анализ, который выявляет даже самую малую концентрацию возбудителя. Полимеразная цепная реакция дает один из наиболее достоверных результатов, поэтому считается дорогостоящей. Также в бланках содержится информация о типе герпеса.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
ИФА — это реакция, которая основана на выделении комплекса антиген—антитело. Вирус герпеса 1 или 2 типа— это антиген для организма (чужеродное вещество), в ответ на который иммунная система выделяет специальные белки — антитела (иммуноглобулины или Ig).
Антитела переносятся в током крови по организму в очаг заболевания и там начинают бороться с инфекцией. Существует несколько основных классов иммуноглобулинов, которые можно обнаружить по время анализа на герпес:
- IgM — это первые антитела, которые формируются в организме больного. В крови пациента их можно найти в течение 2-х недель с момента инфицирования. Кроме того, эти белки появляются в период пробуждения вируса при хроническом герпесе.
- IgG — это антитела, на основании которых можно говорить о хронической инфекции, которая находится в организме больного уже в течение длительного времени. Количество иммуноглобулинов этого класса резко возрастает при очередном рецидиве герпеса.
- IgG к предранним белкам вируса герпеса — это белки-антитела, которые возникают в крови вслед за IgM и также указывают на наличие заболевания в острой или хронической форме.
- Оценивают и такой показатель, как авидность IgG. Он характеризует способность этого иммуноглобулина связываться с вирусом и образовывать комплекс антиген—антитело. В начале болезни этот показатель слабо выражен, но в активную фазу заболевания резко возрастает.
Расшифровку результатов проводит врач. В каждой лаборатории существуют собственные показатели нормы. Больной получает бланк, в котором указаны его значения антител, а также те, от которых необходимо отталкиваться. Если количество иммуноглобулинов ниже нормы — результат отрицательный, если выше — положительный.
Далее необходимо сопоставить концентрацию разных классов антител в крови и расшифровать данные по таблице:
| IgM | IgG к предранним белкам | Поздние IgG | Результат |
| — | + | + | Если ранее пациент не болел герпесом, такой результат говорит о первичной острой инфекции. При беременности в таком случае существует угроза для плода. Если человек — носитель вируса (болезнь ранее проявлялась клинически или обнаруживалась лабораторным способом), речь идет о рецидиве герпеса. Иммунная система матери при беременности обеспечивает защиту плоду, но может быть необходимо ее лечение. |
| — | — | + | Пациент является носителем вируса простого герпеса, и в его организме выработан иммунитет, который не позволяет болезни проявляться клинически. Такой результат обнаруживают в периоды ремиссии герпеса. |
| + | + | — | Такие данные говорят о первой стадии развития герпесной инфекции. В эту фазу существует угроза для жизни плода. |
| + | + | + | |
| — | — | — | Человек никогда не сталкивался с вирусом герпеса, и его иммунная система не предоставляет защиту от него. Если этот анализ проводится во время беременности, врачи беспокоятся о занесении инфекции и развития острого герпеса. В таком случае состояние плода будет находиться под угрозой. |
Отдельно проводится расшифровка анализов на авидность IgG. Возможные результаты представлены в таблице:
| Индекс авидности, % | Результат |
| 50—60% | Этот показатель является пороговой зоной и не может говорить о каком-либо результате. Исследования необходимо повторить через 14 дней. |
| Ниже 50% | Результат говорит о наличии низкоавидных иммуноглобулинов. Они обнаруживаются при первичной инфекции. |
| Выше 60 % | Выявлены высокоавидные иммуноглобулины. Такой результат может появляться при хроническом герпесе или у носителей вируса. |
| Отрицательно | Организм пациента никогда не контактировал с вирусом. При беременности необходимо следить за показателями, поскольку иммунная защита как матери, так и плода, отсутствует. |
Результаты анализов могут отличаться в разных лабораториях. Они зависят от оборудования и других факторов, но, в основном, бывают достоверными.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
РИФ — это еще один способ обнаружить вирус в исследуемом материале, в том числе в крови. Эта реакция показывает наиболее точный результат, если концентрация возбудителя высока. Суть метода сводится к добавлению в субстрат (кровь) специальных красителей с антителами и его последующей микроскопии. Если вирус присутствует, он вступает в химические реакции с антителами и светится под микроскопом.
Расшифровка анализа крови на герпес путем РИФ — это результаты микроскопии. Характерное свечение говорит о наличии возбудителя. На точность данных повлияет не только количество вируса герпеса, но и наличие другой инфекции в крови. Если она там находится в высокой концентрации, можно получить ложноположительный результат.
Культуральный метод
Этот метод заключается в выделении вируса из исследуемого материала и заражении биологических объектов (культуры клеток, куриных эмбрионов) в лабораторных условиях. Способ требует больших затрат времени и не используется в обычных ситуациях. Чаще всего его применяют для научных исследований. Для его выполнения необходима специально оборудованная вирусологическая лаборатория для изоляции возбудителя в помещении и предотвращения его распространения.
Заключение
Герпес — это одно из наиболее распространенных заболеваний в мире. Его характерная особенность заключается в том, что возбудитель остается в крови пациента в течение многих лет и только иногда вызывает клинические проявления болезни. Он не представляет опасности для взрослого человека, но может спровоцировать патологии беременности и передаваться от матери к ребенку при родах. Лучший способ профилактики герпеса — поддержка собственной иммунной системы, которая будет контролировать популяцию вируса и предотвратит появление симптомов болезни.
Источник
Очень интересную статью нашла на просторах интернета. Вдруг кому-нибудь пригодится.
Источник: https://vmede.org/sait/?page=33&id=msprav_Laboratornaja_diagnostika&menu=msprav_Laboratornaja_diagnostika
Лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций
… согласно данным серологического обследования около 90% всего населения планеты инфицировано одним или несколькими серотипами вируса простого герпеса.
Введение. Герпесвирусы широко распространены в человеческой популяции, они пантропны, способны поражать практически все органы и системы организма хозяина, вызывая латентную, острую и хроническую формы инфекции. В настоящее время известно 8 антигенных серотипов вирусов герпеса: вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типа, ветряной оспы (опоясывающего герпеса), цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барра, вирусы герпеса человека 6, 7 и 8-го типов.
(1) Вирус простого герпеса 1-го типа (ВПГ-1) ассоциирован с лабиальным герпесом, герпесом кожи и слизистых оболочек, офтальмогерпесом, пневмонитами, генитальным герпесом, герпетическим энцефалитом.
(2) Вирус простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2) ассоциирован с генитальным герпесом и неонатальным герпесом.
(3) Вирус ветряной оспы (опоясывающего герпеса, ВВО-ОГ) ассоциирован с ветряной оспой и опоясывающим герпесом.
(4) Вирус Эпштейна-Барра (ВЭБ) ассоциирован с назофарингиальной карциномой, инфекционным мононуклеозом, лимфомой Беркитта, волосатой лейкоплакией.
(5) Цитомегаловирус (ЦМВ) ассоциирован с врожденными поражениями ЦНС, ретинопатиями, пневмонитами, гепатитами, сиаладенитами.
(6) Вирус герпеса человека 6-го и 7-го типов (ВГЧ-6:ВГЧ-6А, ВГЧ6Б; ВГЧ-7) — лимфотропные вирусы; предполагают этиологическую связь ВГЧ-6Б с внезапной экзантемой, а ВГЧ-7 с синдромом хронической усталости.
(7) Вирус герпеса человека 8-го типа (ВГЧ-8) ассоциирован с саркомой Капоши у ВИЧ-серонегативных людей, саркомой Капоши, ассоциированной с ВИЧ-инфекцией и СПИДом, а также лимфопролиферативными заболеваниями: многоочаговое заболевание Кастлемана, лимфомой первичного экссудата;
Диагностика герпесвирусной инфекции осуществляется с помощью классического вирусовыделения на чувствительных клеточных культурах, иммунофлюоресцентным и серологическим методами, проведением вульвокольпоцервикоскопии, использованием современных молекулярно-биологических методов (ПЦР, ЛЦР, дот-гибридизация), что позволяет диагностировать всю группу герпесвирусов, включая ВГЧ-6, ВГЧ-7 и ВГЧ-8 типы. Многие исследователи подчеркивают важную роль одновременного использования нескольких методов диагностики. В качестве скринингового метода при диагностике герпесвирусной инфекции рекомендуется использовать метод ПЦР, иммуноферментный анализ (ИФА) и реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), а в качестве подтверждающего — метод выделения герпесвирусов на чувствительных клеточных культурах. Предлагаются и другие диагностические алгоритмы. (!) Вирусологический метод является «золотым стандартом» в диагностике герпесвирусной инфекции. Отличительной особенностью данного метода является высокая степень достоверности полученных результатов, а также высокая чувствительность (85-100%) и специфичность (100%), возможность получения чистой культуры возбудителя для его дальнейшего изучения, в частности испытания чувствительности к антивирусным препаратам; недостатком — длительность проведения (от 2 до 5-14 дней). Кроме того, этот метод недоступен большинству медицинских учреждений, так как культивирование с использованием клеточных культур является процессом трудоемким, дорогостоящим, а также требующим (!) высокой квалификации персонала. Чувствительность метода зависит от времени, прошедшего с момента забора материала до посева, от качества забора материала, условий транспортировки, от качества используемых сред и реагентов.
ПЦР-диагностика ВПГ-1,2. (1) В острой фазе вирусы простого герпеса паразитируют в эпителиальных клетках слизистых оболочек и кожи, вызывают типичные (и атипичные) клинические проявления. Среди атипичных возможны бессимптомные формы. При первичной инфекции ВПГ 1, 2 обнаруживается методом ПЦР в пузырьках (или в трещинах при атипичном течении) максимум в течение 7 дней после первых проявлений. У носителей во время рецидивов – до 4-х дней. При сниженном иммунитете – до 21 дня.
Обнаружение вирусов методом ПЦР в пробе соскоба эпителия свидетельствует об острой фазе инфекции. (2) Во время латентной фазы (ремиссии) вирусы простого герпеса персистируют в нервных ганглиях и отсутствуют в эпителиальных клетках, а значит, не выявляются методом ПЦР в соскобе. Клинических проявлений инфекции при этом нет или наблюдаются остаточные проявления (пузырьки могут заселяться неспецифической микрофлорой).
Выводы: таким образом, если вирусы не обнаружили методом ПЦР в соскобе эпителия, то это означает, либо латентную фазу герпесвирусной инфекции, либо отсутствие вирусов в организме. Проверить есть ли носительство можно только с помощью метода ИФА.
ПЦР-диагностика ЦМВ. Биологическим материалом для ПЦР-исследований могут быть: кровь, ликвор, моча, слюна, мокрота, грудное молоко, соскобы (урогенитальные, из зева), сперма, лаваж, биоптаты, в зависимости от формы заболевания. Для беременных адекватной пробой для ПЦР-исследования является соскоб из цервикального канала (при положительном результате – угроза плоду).
ИФА-диагностика ВПГ-1, ВПГ-2 и ЦМВ. Необходимо помнить: исследование сыворотки крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) на наличие антител к герпесвирусам поможет установить, есть ли носительство и фазу заболевания (первичный острый процесс, латенция или вторичное обострение, — рецидив).
Первичное заражение. При первичном заражении на 5-7 день вырабатываются IgM, через 10-14 дней – низкоавидные IgG, затем постепенно авидность IgG возрастает и они становятся высокоавидными (термин «авидность» означает степень сродства антител к антигенам и, соответственно, силу связывания антител с антигенами). IgM исчезают через 1 месяц, низкоавидные IgG – через 1-3 месяца, а IgG (поздние, высокоавидные) циркулируют в крови носителя пожизненно. Так как IgM вырабатываются обычно только при первичной инфекции, то и в лабораторной диагностике они являются маркерами первичной герпесвирусной инфекции. Из-за низкой специфичности IgM они могут перекрестно реагировать (с ревматоидным фактором и др.) и вызывать появление ложноположительных результатов. Для исключения ошибки необходимо проверить наличие низкоавидных IgG или повторить исследование IgM через 2 недели (при развитии первичного процесса должны вновь выявиться IgM и появиться низкоавидные IgG). Если низкоавидные IgG не появились, а IgM выявились снова, то этот положительный результат надо считать ложным. Наиболее специфичными маркерами первичной герпесвирусной инфекции являются низкоавидные IgG. Они никогда не вырабатываются при повторном заражении или рецидиве. Тест на авидность IgG дает информацию о том, выявились ли IgG и какие выявились IgG – низкоавидные или высокоавидные. Низкоавидные IgG более специфичные антитела, чем IgM, поэтому при использовании теста на авидность IgG не возникает проблем с ложноположительными результатами.
Рецидив и реинфекция. Активация герпесвирусной инфекции у носителей (рецидивы) и реинфекция сопровождаются: (1) появлением и нарастанием титров IgG к предранним белкам вирусов (всегда), (2) нарастанием в 2-4 раза титра имеющихся поздних, высокоавидных IgG (не всегда). IgG к предранним белкам вирусов вырабатываются в ответ на самое начало развития вирусного цикла в организме человека, на неструктурные предранние белки. Они появляются на 5-7 день активации вирусной инфекции и циркулируют в крови 1-2 месяца после наступления ремиссии. Это очень специфичные антитела, поэтому при их выявлении не возникает ложноположительных результатов. IgG к предранним белкам вирусов являются однозначными маркерами активности вирусной инфекции. Они вырабатываются как при первичной острой инфекции, так и во время рецидива и реинфекции. Количество поздних IgG у носителей может варьировать в зависимости от стадии заболевания, от состояния иммунной системы пациента вообще и на момент обследования в частности. Например, при наличии иммуносупрессии, которую может вызывать длительное течение хронической вирусной инфекции, во время рецидива количество поздних IgG совсем не увеличивается, или увеличивается, но не в 4 раза, как при классическом иммунном ответе на рецидив. Поэтому количественный показатель IgG далеко не всегда обладает диагностической ценностью, даже в динамике.
Выводы. Для вирусоносителей единственный надежный тест для определения активности герпесвирусов это выявление IgG к предранним белкам вирусов (полуколичественно). Появление их в любом титре свидетельствует об активности вирусной инфекции. Увеличение титра через 1-3 недели свидетельствует о развитии рецидива, а уменьшение – о наступлении ремиссии. Выявление поздних IgG при отсутствии IgG к предранним белкам вирусов свидетельствует о спокойном носительстве, латентной фазе. Выявление IgM и низкоавидных IgG, предранних IgG при отсутствии поздних IgG, — свидетельствует о первичном инфекционном процессе. Отсутствие поздних IgG, IgM и IgG к предранним белкам герпесвирусов, то есть серонегативность в отношении данных вирусов, означает отсутствие как носительства, так и развития инфекции.
См. также статью (медицинский портал DoctorSPB.ru, раздел «лабораторная диагностика»): «Лабораторная диагностика ВПГ (вирус простого герпеса)».
Лабораторная диагностика и интерпретация результатов определения в сыворотке крови антител классов М и G к антигенам вируса Эпштейна-Барр (ЕBV/ВЭБ). ВЭБ относится к наиболее распространенным герпесвирусам, носительство в различных регионах достигает 100%. Однако актуальной является лабораторная диагностика данного вируса при дифференциальной диагностике инфекционного мононуклеоза, а также в поисках этиологии некоторых кардиологических, онкологических и др. патологий. Острая фаза мононуклеоза характеризуется выявлением вируса Эпштейна-Барр методом ПЦР из мазка из зева. Однако наиболее точно выяснить стадию заболевания или носительство можно с помощью метода ИФА. В настоящее время различают 3 диагностически значимых антигена ЕBV – ранний (ЕА), капсидный (VСА) и ядерный (ЕВNА). Определяя антитела к данным антигенам, а именно, — (1) IgM, IgG к VCA, (2) IgG к EA и (3) IgG к EBNA, можно диагностировать стадию инфекции EBV: первичную, прошедшую (паст-инфекцию) и реактивацию. Отсутствие инфицирования — VСА: IgM (-) IgG (-); ЕА IgG (-); ЕВNА IgG (-); очень ранняя первичная инфекция — VСА: IgM (+) IgG (-); ЕА IgG (-); ЕВNА IgG (-); ранняя первичная инфекция — VСА: IgM (+) IgG (+); ЕА IgG (+); ЕВNА IgG (-); поздняя первичная инфекция — VСА: IgM (+/-) IgG (+); ЕА IgG (-/+); ЕВNА IgG (+); паст-инфекция — VСА: IgM (-) IgG (+); ЕА IgG (-); ЕВNА IgG (+); реактивация — VСА: IgM (+/-) IgG (+); ЕА IgG (+); ЕВNА IgG (+). Наиболее адекватно эти маркеры выявляются с помощью тест-систем ВСМ производства США (высокая чувствительность и воспроизводимость результатов).
Рекомендуется определение всех упомянутых серологических маркеров в комплексе, так как это повышает вероятность постановки точного диагноза и дает возможность выбора адекватной терапии. Особую трудность представляет диагностика ВЭБ-инфекции у иммуноскомпрометированных пациентов; в этом случае серологический профиль может быть сильно искажен и непоказателен. Для диагностики ВЭБ–инфекции параллельно с определением серологических маркеров целесообразно выявление ДНК возбудителя методом ПЦР в крови или другом биоматериале (мазки из зева при инфекционном мононуклеозе). Для постановки клинического диагноза необходимо сопоставлять результаты серологического тестирования с результатами других анализов, симптоматикой и анамнезом пациента.
См. также статью (медицинский портал DoctorSPB.ru, раздел «лабораторная диагностика»): «Лабораторная диагностика инфекции, вызванной вирусом Эпштейн-Барр».
Источник
