Влияние герпеса на лимфоциты

Клинический исход первичной ГИ в значительной мере определяется иммунным статусом организма. В то же время следует отметить, что характер патогенетических изменений в организме больных герпесом в значительной мере обусловлен возможностью интеграции генома вируса в геном клетки-хозяина, в частности в паравертебральных ганглиях, а также троп-ностью ВПГ и других герпесвирусов к форменным элементам крови и иммуноцитам (эритроциты, тромбоциты, гранулоциты, макрофаги, лимфоциты)- Это способствует пожизненной перси-стенции структур ВПГ в организме человека и обусловливает изменение клеточного и гуморального иммунитета. Более того, сегодня ГИ рассматривается как инфекционная (приобретенная) болезнь иммунной системы (Баринский И. Ф. и др., 1986), при которой длительная персистенция вируса в ряде случаев сопровождается продуктивной инфекцией ВПГ практически во всех видах клеток иммунной системы, что проявляется их функциональной недостаточностью и способствует формированию иммунодефицита (Баринский И. Ф., 1988; КоломиецА. А. и др., 1992). Нами, а также другими исследователями, показано, что основная роль в формировании противогерпетического иммунитета принадлежит клеточным механизмам, состояние которых во многом определяет как исход первичного инфицирования, так и частоту и напряженность рецидивов заболевания (Баринский И. Ф. и др., 1986; Исаков В. А. и др., 1993). Длительность иммунодефицита при вирусных инфекциях будет во многом определяться как свойствами самого вируса, так и типом ответных реакций больного.

Полагают, что достаточно высокий уровень специфических антител в крови больных рецидивирующим герпесом стабилизирует персистенцию вируса, но не предупреждает рецидивов (Бочаров А. Ф. и др., 1982; Семенова Т. Б. и др., 1987). Т. Б. Семенова и др. (1987) показали, что при тяжелом течении рецидивирующей ГИ с поражением кожи и слизистых оболочек заболевание протекает на фоне высоких титров комплементсвязы-вающих антител со снижением количественного содержания лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, при этом менялось соотношение популяций лимфоцитов.

Многочисленные исследователи (Баринский И. Ф. и др., 1986; Исаков В. А. и др., 1991,1997; Пригожина В. К. и др., 1990; Рахманова А. Г. и др., 1995) показали, что при ГИ снижено общее ко* личество CD3+ клеток (Т-лимфоциты общие), CD4+ (Т-хелперы), снижен иммунорегуляторный индекс (CD4: CD8). Снижена активность естественных киллеров и антителозависимая клеточная ци-тотоксичность , угнетена способность лейкоцитов к синтезу эндогенного интерферона. Выявленные изменения характерны для больных со среднетяжелым и тяжелым течением рецидивирующего герпеса. Они зарегистрированы в фазе рецидива, в фазе ремиссии наблюдалась положительная динамика изученных иммунологических показателей, однако они оставались ниже нормы.
Нами проведено комплексное иммунологическое обследование 148 больных генитальным герпесом (ГГ ), обусловленным ВПГ. У 42% больных отмечалось тяжелое течение ТТ (рецидив не менее 1 раза в месяц), 33% имели среднетяжелую (1 рецидив в 2 — 3 месяца) и 25% — латентную форму ГГ. Причем как моноинфекция ГГ протекал у 22% больных, в остальных случаях были выявлены различные микробные ассоциации.

В периферической крови определяли количество иммуноком-петентных клеток (CD3, CD4, CD8 для Т-клеток и CD22 для В-кле-ток), пролиферативную активность лимфоцитов под действием Т- и В-клеточных митогенов в РБТЛ, активность НК-клеток анти-телозависимую цитотоксичность лимфоцитов (АЗЦТЛ). Исследовали фагоцитарную и метаболическую активность лейкоцитов по спонтанному и индуцированному тесту НСТ (тест восстановления нитросинего тетразолия), уровень катионных белков (КБ) лакто-феррина (ЛФ) и миелопероксидазы (МПО), показатели церулоп-лазмина (ЦП), трансферрина (ТФ), иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Исследовали уровень интерлейкинов 1 и 2 (табл. Ни 12).

В результате обследования больных с обострением ГИ установлено, что уровень фагоцитарной активности лейкоцитов был, как правило, нормальным или имел тенденцию к повышению (рис. 2). Выраженное снижение числа фагоцитирующих клеток (менее 30% при норме 52,5%) имело место у незначительного числа больных (частота — 0,1). В то же время при обострении хронического процесса обнаружено достоверное повышение показателей оксидазной активности лейкоцитов как в спонтанном, так и в индуцированном тесте НСТ по сравнению с контрольной группой (НСТ спонтанный =38,0+7,6%; НСТ индуцированный = 60,0 + 6,9% против 18,4 ±2,1% и 36,9 ± 3,6% в контроле; Р

При наступлении ремиссии через 2-3 недели после обострения у больных отмечалось снижение показателей индуцированного НСТ-теста (до 27,6 ± 2,9% против 36,9 ± 3,6% в контроле). В ряде случаев (частота — 0,3) имело место снижение числа фагоцитирующих кле -т ок. Процент фагоцитоза составлял 16 -30% против 41 -68% в контрольной группе. На фоне снижения функциональной активности лейкоцитов выявлялось нарастание в крови IgA (2,47 ± 0,19 г/л против 1,90+0,08 г/л в контроле; Р

Также представляло интерес проанализировать состояние фагоцитарной и окислительной функции лейкоцитов у 40 больных рецидивирующим генитальным герпесом (РГГ) в зависимости от продолжительности и фазы заболевания, а также с учетом частоты рецидивов (рис. 4)* Больные были распределены на две группы: в первую вошли пациенты с продолжительностью заболевания до 2 лет и с частотой рецидивирования не более 2 раз в год. Вторую группу составили лица, болеющие герпесом более 2 лет и с частотой обострения заболевания более 3 раз в год.

Показано, что в период обострения инфекции, как правило, отмечалось снижение фагоцитарной активности и увеличение числа клеток, способных восстанавливать нитросиний тетразо-лий в условиях стимуляции нейтрофилов ФГА и в спонтанном НСТ-тесте. Очевидно, обнаруженные изменения связаны с наличием большого количества вирусного антигена в очаге воспаления и интенсивным нарастанием в лейкоцитах активных форм кислорода.

К периоду клинической ремиссии у больных первой группы уровень исследуемых защитных реакций был в пределах величин, определяемых у здоровых людей (рис. 4). В то же время у больных второй группы в фазе ремиссии наблюдалось отчетливое повышение показателей спонтанного и индуцированного НСТ-теста, которые оказались несколько ниже значений, характерных для периода обострения (см. рис. 4). В период ремиссии у больных болеющих ГГ более 2 лет, фагоцитоз был активнее, чем в фазе обострения, но значительно ниже показателей здоровых лиц. Выявленные изменения, на наш взгляд, обусловлены хронической антигенной нагрузкой и отражают состояние функционального перенапряжения фагоцитов у больных в период ремиссии.

Изучение активности клеток моноцитаряо макрофагаль-ной системы (ММС) представляет интерес для клиницистов потому, что клетки ММС участвуют во многих фазах иммунного ответа и в первую очередь взаимодействуют с Т-лимфоцитами в процессе распознавания антигена и переработки антигенной информации. Непосредственно или косвенно активированные Т-лимфоцитами клетки ММС играют важную роль в эффек-торной фазе иммунного ответа (цитотоксическое действие, поглощение иммунных комплексов).

В связи с этим мы дополнительно исследовали особенности макрофагальных реакций и функциональную активность Т-лимфоцитов in vivo в тесте кожного окна по Ребаку (Rebuck F., Gromnley F., 1925) у больных простым герпесом в остром периоде болезни. Ранее было показано, что активность иммунокомпетентных клеток дермального слоя может быть определена по выходу макрофагов в зону асептического воспаления (в суточной дермограмме) и по их реакции на митоге-ны туберкулин, ФГА (митогены Т-лимфоцитов), а также пи-рогенал (митоген 6-лимфоцитов и макрофагов) (Гользанд И. В. и др., 1984).

В суточной дермограмме, исследованной нами у 15 больных ГГ в период рецидива, выявлено спонтанное торможение миграции макрофагов (МФ), увеличенные выход лимфоцитов (ЛФ) и нейтрофилов (НФ), а также снижение коэффициента (МН + МФ) : НФ по сравнению с контрольной группой здоровых лиц {табл. 13),

Введение туберкулина в зону окна сопровождалось умеренным выходом лимфоцитов в очаг воспаления (11,9%), уменьшением числа нейтрофилов (34,5%). Миграция макрофагов была выше, чем у здоровых лиц (53,7% и 36,4% соответственно). Коэффициент (МН + МФ): НФ был достоверно выше, чем в контрольной группе. Очевидно, это отражает перераспределение иммуноцитов дермы, мигрирующих в воспалительный очаг под влиянием митогенов.

При постановке внутрикожной пробы с туберкулином у 3 из 15 больных результат был отрицательным, у 12 — умеренно положительным (диаметр папулы — 11 мм, у здоровых лиц — 7 мм; Р

Таким образом, у больных РГИ в фазе рецидива возникают существенные изменения как в соотношении клеток, определяемых в дермограмме, так и в их реакции на митогены. В-клет-ки активнее отвечают на пирогенал, чем Т-лимфоциты на туберкулин, что подтверждает функциональную неполноценность Т-клеточного звена иммунитета у обследованных больных.

Возросший в последние годы интерес ученых к изучению роли факторов неспецифической резистентности в противовирусном иммунитете не случаен. Являясь филогенетически более древними механизмами защиты организма, чем иммунная система, различные компоненты неспецифической резистентности вносят свой вклад в комплекс ответных реакций организма на вирусную инфекцию. Следует подчеркнуть, что по времени эти события предшествуют развитию специфической иммунной реакции (Мазинг Ю. А., Данилова М. А., 1989).

Важными факторами неспецифической защиты организма, наряду с представленными выше, являются катионные белки (КБ) нейтрофильных гранулоцитов (НГ). Выделяют ферментные (миелопероксидаза, лизоцим, катепсин 6, эластаза) и неферментные (дифенсины, бактерицидный проницаемость увеличивающий протеин, лактоферрин) катионные белки (Кокряков В. Н. и др., 1989). В доступной нам литературе мы не встретили сообщений, посвященных изучению динамики КБ у больных герпесом. Активность КБ мы определяли в реакции лизосомально-катионного теста (ЛКТ) (Брязжико-ваТ. С, 1995).

Установлено, что содержащиеся в гранулах НГ катионные белки выполняют разнообразные функции в воспалительной реакции (медиаторов воспаления, неспецифических опсонинов при фагоцитозе, модуляторов свертывания крови и фибрино-лиза и т. д.). Катионные белки обеспечивают мощный анти-микробный потенциал НГ благодаря комплексному воздействию на структуру и обмен веществ микроорганизмов. Низкомолекулярные КБ — дифенсины, являясь высокоосновными поверхностными соединениями, подавляют репродукцию ВПГ, действуя на оболочку вируса и лишая его мембранотроп-ности. Следовательно, они активны в отношении свободного и сорбированного на клетке вируса (Кокряков В. Н., 1988) и являются факторами санации организма от вирусов и подавления инфекции. Мы показали, что острая фаза ГИ сопровождается падением суммарного содержания КБ, определяемых в ЛКТ, что может говорить об интенсивной секреции НГ и активном вовлечении этих клеток в систему защитных реакций организма. Дальнейшая положительная динамика инфекционного процесса сопровождается повышением содержания КБ и соответственно восстановлением показателей ЛКТ до нормальных значений. Тем не менее высокий уровень в сыворотке крови миелопероксидазы (МПО) на протяжении всего цикла болезни может свидетельствовать о постоянном напряжении секреции НГ, обеспечиваемой за счет ускорения циркуляции НГ и более быстрого обновления пула этих клеток в крови. Показатели НСТ-теста и фагоцитоза НГ дополнительно свидетельствуют об активном вовлечении в патологический процесс НГ, что сопровождается истощением функции этих клеток в фазе ремиссии.

Определенный интерес представляют металлопротеиды це-рулоплазмин (ЦП), трансферрин (ТФ) и лактоферрин (ЛФ), являющиеся белками острой фазы воспаления, основной признак которых — быстрое и значительное изменение концентрации в результате нарушения гомеостаза независимо от природы и места приложения вызвавшего его стимула. Как известно, механизм острофазной реакции заключается в том, что под действием повреждающего фактора выделяются биологически активные вещества, способствующие увеличению синтеза ИЛ-1 и других цитокинов. Стимулируются защитные реакции организма и усиливается синтез печенью белков острой фазы воспаления — в частности, ЦП. Поэтому при выраженной воспалительной реакции наблюдается более высокая концентрация медьсвязывающего белка крови.

Принято считать, что железосодежащий белок относится к отрицательным острофазным белкам, концентрация которых падает в начале болезни. Более низкое содержание ТФ у больных неосложненным и оеобенно осложненным гриппом и простым герпесом * остром периоде болезни подтверждает это положение При этом нами было показано, что чем легче течение вирусных инфекций, тем менее значимо снижение ТФ, чем тяжелее клиническое течение гриппа и герпеса, тем существеннее снижаются значения ТФ в сыворотке крови (Исаков В. А. и др., 1996).

Механизм снижения ТФ тот же — развитие острой фазы воспалительного ответа. Увеличение уровня ИЛ-1 способствует освобождению ЛФ нейтрофилами, именно ЛФ захватывает железо и ведет к гшюсидеремии. Можно предположить что снижение уровня сывороточного железа, сопровождающее развитие многих воспалительных заболевания, и приводит к уменьшению концентрации ТФ. Возможно, и медьсвязывающий белок участвует в этом процессе, так как обладает выраженными фер-роксидазными свойствами: он окисляет Fe2* -> Fe3+, которое и встраивается в молекулу апотрансферина.

Лактоферрин (ЛФ) играет важную роль в межклеточной кооперации фагоцитирующих клеток. Рецепторы к ЛФ обнаружены на моноцитах, макрофагах, НГ, активированных Т-лимфоцитах, а также В-лимфоцитах (Naidu A. S., 1991). Поглощение ЛФ мононуклеарными фагоцитами угнетает их способность к образованию гидроксильного радикала и защищает клетки от аутопероксидации мембраны. Повышение уровня ЛФ в сыворотке крови больных ГИ можно рассматривать как антиокси-дантную защиту, осуществляемую НГ, и благоприятный прогностический признак, свидетельствующий о наступлении ремиссии (Брязжикова Т. С. и др., 1995).
Лактоферрин является маркером специфических гранул НГ, на внутренней мембране которых находится набор рецепторов этих клеток. Секреция ЛФ из специфических гранул сопровождается активацией рецепторного поля клетки за счет встраивания белков-рецепторов в наружную мембрану НГ. В динамике мы видим значительное повышение уровня ЛФ, достигающего максимальных значений в фазе ремиссии, Это может сопровождаться повышением функциональной активности НГ с последующей активацией клеток системы мононуклеарных фагоцитов, осуществляющих элиминацию возбудителя. Тем не менее мы наблюдаем повышенный уровень ЦИК в период ремиссии, что говорит о неполноценности клеток ММС, так как ВПГ имеет тропизм к этим клеткам и может повреждать их. Таким образом, наблюдается несостоятельность клеток-эффекторов как в стадии обострения, так и ремиссия простого герпеса, которая в данном случае является лишь нестойким равновесием между организмом хозяина и возбудителем, накапливая потенциал для следующего цикла болезни.

Известно, что фагоцитоз сопровождается образованием активных форм кислорода (АФК), генерируемых нейтрофиламн в значительных количествах на начальных стадиях стимуляции иммунокомпетентных клеток. Образование АФК является важным моментом, обеспечивающим фагоцитарную активность нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов. Однако чрезмерно высокие концентрации АФК оказывают дестабилизирующее действие на клеточные мембраны, инициируют процессы ле-рекисного окисления липидов, могут стать причиной угнетения фагоцитарной активности клеток. Для инактивации негативного воздействия АФК на клетки и ткани организма в последнем имеется система антиоксидантной защиты (АОЗ). Основным ферментом специфической АОЗ в организме считается супероксиддисмутаза (СОД). Наряду с СОД активными компонентами АОЗ являются каталаза, церулоплазмин, глу-татион-пероксядаза, глутатион, аскорбиновая и мочевая кислота, глюкоза, маннит и пр.

Основным содержащим медь белком плазмы крови является церулоплазмин (ЦП). Он связывает 95% всей меди, использует ОН для ферментативной активности при окислении Fe2+ до Fe3+, после чего железо связывается трансферрином. Существенно, что окисление Fe2+ до Fe3+ в отличие от неферментативного окисления Fe2* в присутствии кислорода не сопровождается образованием супероксиданиона (02). Поэтому в окислительных реакциях с участием ионов Fe2+ церулоплазмин оказывается основным антиоксидантом плазмы, своеобразной ловушкой для АФК (Логинов А. С, Матюшин Б. Н., 1994; Gutterudge J. М. С. et al., 1979).

В сыворотках крови больных рецидивирующим ГГ уровень ЦП был значительно выше показателей здоровых лиц, что указывает на повышение антиоксидантного потенциала сыворотки крови в остром периоде болезни * Фаза клинической ремиссии характеризовалась снижением концентрации ЦП, однако уровень его оставался еще достоверно выше, чем у здоровых лиц. Это свидетельствует о напряжении системы АОЗ и в периоде ремиссии ГИ, что, по-видимому, обусловлено необходимостью инактивации повышенных концентраций АФК.

Важную роль в ферментативной продукции АФК играют металлы переменной валентности (железо и медь). Основная роль трансферрина и лактоферрина в организме заключается в акцептировании свободного железа, что препятствует развитию реакций образования гидроксильного радикала (ОН), катализируемого ионами железа.

И. В. Дробот (1992) и В. В. Туркин (1994) показали, что у детей с псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом (вирус Эпштейна — Барр) увеличивался уровень не только им-мунореактивной формы ЦП, значительно возрастало содержание в крови ферментативно-активной фракции этого белка. Последнее позволяет предполагать важную защитную роль именно этой формы ЦП, что, по-видимому, обусловлено способностью медьоксидазы инактивировать свободные радикалы, в избытке имеющиеся в очаге воспаления. Кроме этого, ЦП способствует усилению продукции антител, улучшает выработку ИЛ-1 активированными макрофагами, повышает пролиферацию цитотоксических Т-клеток и К-клеток. Таким образом, исследованные нами металлопротеиды (ЦП, ТФ и ЛФ) обладают не только антиоксидантными свойствами, но и являются важными компонентами системы неспецифической ре-зистентности , обеспечивая устойчивость организма к бактериальным и вирусным инфекциям (Исаков В. А. и др., 1996; Туркин В. В., 1994).

В заключение следует отметить, что при рецидивирующей ГИ угнетены и разбалансированы системы Т- и В-клеточного иммунитета, которым отводится решающая роль в противовирусной защите. Вместе с тем наблюдается функциональная неполноценность многих факторов неспецифической резистент-ности организма. Причем выявленные нарушения в иммунном гомеостазе регистрируются в фазе рецидива и ремиссии заболевания, тем самым во многом предопределяя и объясняя развитие длительной персистенции герпесвирусов в организме с установлением рецидивирующего течения болезни. Вышеизложенные обстоятельства должны несомненно учитываться практическими врачами при лечении больных различными формами герпетической инфекции.

Читать далее: Особенности лабораторной работы и обследования пациентов при подозрении на герпесвирусные инфекции