Вирус простого герпеса культивирование
Общие свойства:
«однажды инфицирован – инфицирован на всю жизнь».
В определенных клетках сохраняются в виде копий кольцевидных ДНК автономно от хромосом (неинтегративная вирогения). Выделяют: латентную инфекцию и реактивацию.
Морфология:
— размер вириона – от 100 до 300 нм;
— нуклеокапсид (кор) кубической симметрии, суперкапсид, аморфный слой (tegument);
— нуклеокапсид – 162 капсомера;
— линейная двунитчатая вирусная ДНК;
— 70-200 функциональных и структурных белков:
— сверхранние,
— ранние,
— поздние.
Около 30 гликопротеидов:
— поверхностные и капсидные;
— ДНК-полимераза.
Антигенные свойства. Гликопротеины внешней оболочки – типоспецифические АГ, белки нуклеокапсида – группоспецифические АГ.
Лечение герпесвирусных инфекций: ацикловир, ганцикловир – подавление ДНК-полимеразы, рибавирин – подавление ферментов, обеспечивающих кэппинг вирусной мРНК.
Вирус простого герпеса (ВПГ):
ВПГ-1 (лабиальный герпес) и
ВПГ-2 (генитальный герпес).
Культивирование:
культура ткани, ЦПД;
куриные эмбрионы – заражение в хорион-аллантоисную оболочку → бляшки (ВПГ-1 – мелкие бляшки, ВПГ-2 – крупные);
организм лабораторных животных: мыши, крысы, морские свинки, хомячки, кролики, собаки, обезьяны. Чаще – заражение кроликов (интраназально или в роговицу глаза) или мышей-сосунков (в мозг).
Патогенез ВПГ1.
Источник инфекции – человек больной в латентной или активной форме.
Механизм заражения – контактный.
Входные ворота – слизистая ротовой полости, носа и поврежденная кожа.
Первичная контаминация – в раннем детстве при контакте с инфицированной слюной ( афтозный, везикулярно-эрозивный гингивостоматит).
Вирус через нервные окончания проникает в регионарные ганглии чувствительных нервов (ганглии тройничного нерва), где сохраняется в ядрах нейронов в виде кольцевойДНК, периодически эмигрирует на периферию бессимптомно или с реактивацией.
Вирус может пойти по восходящему пути→ энцефалит.
Реактивация: солнечный загар, инфекции, ослабление иммунитета, эмоциональный стресс, менструация, хирургические вмешательства на тройничном нерве, применение иммунодепрессантов, трансплантация органов.
Клинические проявления реактивации ВПГ-1: лабиальный герпес, кожного герпеса (особенно лица), кератоконъюнктивит (офтальмогерпес).
Патогенез ВПГ2:
ВПГ-2 – тропизм к эпителию половой сферы.
Первичное заражение – половым путем.
Бессимптомное инфицирование → регионарные (сакральные) ганглии задних корешков спинного мозга.
Лишь у 1-15% инфицированных через 2-3 дня появляются везикулезно-эрозивные высыпания на эритоматозно-отечной слизистой оболочке половых органов.
Особая опасность – для плода (TORCH). Плод инфицируется в родовом канале → генерализованный герпес. Кесарево сечение.
Саногенез
При инфицировании – противовирусные АТ, но вирус в присутствии специфических АТ не теряет своей инфекционности.
Главная роль в противовирусной защите при герпетической инфекции – ЦТЛ.
Склонность к генерализации герпеса у больных с дефектами Т-клеточного иммунитета.
Микробиологическая диагностика:
Проводится при стертых или скрытых формах, в предродовом периоде
Материал: отделяемое из высыпаний, кровь.
Цитологический метод (проба Цанка) – выявление характерных многоядерных гигантских клеток с тельцами включений. РИФ.
Вирусологический метод: выделение вируса на различных культурах клеток, с последующей его идентификацией в реакциях ИФА, РН, РИФ. ПЦР.
Серологический метод: АТ в ИФА. Классы АТ, индекс авидности. АТ к «ранним» белкам вирусов.
Лечение и профилактика:
При тяжелых поражениях назначают ацикловир.
Вакцина герпетическая культуральная инактивированная содержит ВПГ1 и ВПГ2, применяется для лечения больных с герпетическими поражениями в стадию ремиссии не ранее, чем через 2 недели после исчезновения клинических проявлений герпеса, при офтальмогерпесе не ранее, чем через 1 мес.
Вакцинация снижает частоту рецидивов герпетической инфекции.
Varicella-Zoster Virus:
ВГЧ3: Вирус вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса – Varicella-Zoster Virus, (ВОГ, VZV).
Вирус ветряной оспы вызывает распространенную детскую инфекцию – ветряную оспу или ветрянку, персистируя в чувствительных ганглиях, вирус реактивируется в виде опоясывающего герпеса (герпес-зостер), проявляющегося невралгиями и высыпаниями по ходу нервных стволов.
Патогенез VZV-инфекции
Обычно болеют дети (чаще 5-9 лет), чаще легко, без осложнений. Взрослые – тяжелее, с осложнениями.
Источник инфекции – больной человек. Больной заразен за 24 ч до появления сыпи и на протяжении всего периода высыпаний.
Механизм заражения аспирационный, путь заражения – воздушно-капельный.
Входные ворота – эпителий ВДП → первичная репликация → кровь → генерализация.
Главная мишень – клетки базального слоя эпидермиса. Основной симптом – экзантема на коже туловища, реже – лица, шея, конечности, энантема.
Наиболее вероятное осложнение – вторичная пиогенная инфекция везикул. У 15% взрослых пневмонии. Могут развиться постинфекционные энцефалиты и менингиты.
Патогенез VZV-инфекции
Возможно трансплацентарное заражение плода от женщины, заболевшей ветряной оспой во время беременности.
Если с момента инфицирования до родов проходит менее 5 дней – родившийся ребенок может заболеть тяжелой формой ветряной оспы.
Ветряная оспа, перенесенная в первые месяцы беременности, может вызывать тяжелые аномалии развития плода, а в поздние сроки – преждевременные роды.
После выздоровления вирус проникает в регионарные ганглии (любого уровня спинного мозга, тройничного и лицевого нервов) и персистирует в
нейронах в виде кольцевой ДНК.
При воздействии раздражающего
фактора – реактивация – опоясывающий герпес.
Саногенез
После перенесенной ветряной оспы иммунитет на всю жизнь.
Обеспечивая устойчивость к рецидивам ветряной оспы (т.е. к генерализованному процессу), АТ не спасают от местных проявлений реактивации вируса.
Повышенная чувствительность к ОГ у пожилых людей и больных с дефектами клеточного иммунитета.
Микробиологическая диагностика
Материал: содержимое кожных высыпаний, отделяемое слизистой оболочки носоглотки и сыворотка крови.
Цитологический метод: в мазках-отпечатках из очагов кожных поражений, окрашенных по Романовскому-Гимзе или гематоксилином и эозином, – многоядерные гигантские клетки с внутриядерными включениями.
Вирусологический метод: выделение вируса на культуре клеток, куриных эмбрионах и лабораторных животных и идентификация в РИФ, ИФА.
Для быстрой идентификации вируса в материале – РИФ и ПЦР.
Серологический метод: Определение вирусспецифических АТ (IgA, IgM, IgG) в реакциях ИФА и РИА. Сыворотка переболевших опоясывающим герпесом содержит больше специфических АТ, чем сыворотки перенесших ветряную оспу.
Лечение и профилактика
Интерферон, средства, уменьшающие зуд, анальгетики (менавазин). Ацикловир, видарабин.
Живая вакцина против ветряной оспы.
Пациентов с высоким риском развития тяжелой формы инфекции пассивно иммунизируют varicella-zoster-Ig.
Пациента изолируют на дому, изоляция прекращается через 5 дней после появления последнего свежего элемента сыпи. Лица в периоде «высохших корочек» не заразны и могут допускаться в коллектив. Дети дошкольного возраста, находящиеся в контакте с больным и не болевшие ветряной оспой, не допускаются в детские учреждения с 11-го по 21-ый день контакта.
Вирус Эпштейна-Барр:
ВГЧ4.
1964 – Мишель Эпштейн и Эвелина Барр выделили вирус из лимфомы Беркитта.
Лимфома Беркитта – дети 5-8 лет. Первичная локализация опухоли – верхняя челюсть, хорошо поддается химиотерапии. Центральная Африка, Океания.
Карцинома носоглотки (мужское население Китая).
Внутрилабораторная вспышка инфекционного мононуклеоза.
ВЭБ встречается повсеместно, большинство людей инфицируется в детстве, к трем годам 30-80% (в экономически отсталых странах почти 100% – плотность контактов) становятся носителями ВЭБ.
Вирус Эпштейна-Барр:
Вирус имеет специфические АГ:
EB-VCA – вирусный капсидный АГ,
EB-NA – ядерный АГ,
EB-EA – ранний поверхностный АГ,
ЕВ-МА – мембранный АГ.
Обнаружение раннего поверхностного и ядерного антигенов свидетельствует об острой инфекции ВЭБ, а выявление позднего мембранного и капсидного антигенов – о давнем инфицировании и латентной инфекции.
Культуральные свойства
Вирус размножается только в культуре лимфобластов опухоли Беркитта, клетках крови больных инфекционным мононуклеозом, лейкемических клетках и в культуре клеток мозга здорового человека.
ВЭБ может вызывать лимфоидные неоплазии у мармозеток (маленьких бразильских обезьян-игрунков) и совиных обезьян (похожих на кошку южноамериканских обыкновенных ночных обезьян, или дурукули).
Патогенез ВЭБ-инфекции:
Источник инфекции – больной с бессимптомной или манифестной формами, вирусоносители (после перенесенного заболевания из носоглоточных смывов многих пациентов вирус выделяется до 16 мес.).
Пути заражения:
воздушно-капельный («болезнью поцелуев»);
фекально-оральный механизм, алиментарный путь (при участии контаминированных вирусом пищевых продуктов);
контактно-бытовой;
контактный (половой);
трансфузионный.
Стадии инфекции ВЭБ:
латентная вирусная персистенция;
литическая вирусная репликация.
Латентная инфекция:
постоянное количество копий генома;
ограниченная экспрессия генов;
эписомальный геном;
возможность возникновения новообразований.
Литическая инфекция
острая стадия инфекции;
активное размножение вируса;
цитопатология;
активное выделение вируса во внешнюю среду.
Клетки, поражаемые ВЭБ
В- и Т-лимфоциты;
эпителиальные клетки носоглотки;
железистый эпителий желудка, слюнных желез, щитовидной железы.
Инфекционный мононуклеоз
генерализованная лимфоаденопатия;
лихорадка;
тонзилит;
гепатоспленомегалия;
характерные гематологические изменения (атипичные мононуклеары).
ЛИМФОМА БЕРКИТТА — злокачественная лимфоидная опухоль, локализующаяся, как правило, вне лимфатических узлов в различных органах и тканях (верхняя челюсть, почки, яичники, печень, нервная система и др.).
Микробиологическая диагностика
При инфекционном мононуклеозе в процессе заболевания появляются гетерофильные антитела к эритроцитам различных животных (барана, лошади, быка и др.). В 1932 г. Пауль и Буннель предложили реакцию, основанную на обнаружении в сыворотке крови больного противобараньих агглютининов.
ПЦР.
Цитологический метод исследования отпечатков с небных миндалин. Атипичные мононуклеары – инфекционный мононуклеоз.
Цитомегаловирус (ЦМВ)
ВГЧ5.
Гигантские или цитомегалические клетки размером 25-40 мкм с крупными внутриядерными включениями, ограниченными от ядерной мембраны бледным, не воспринимающим окраску ободком (совиный глаз).
Медленная репликация.
Низкая патогенность.
Инфицирование ЦМВ распространено повсеместно, но редко проявляется клинически.
Патогенез:
Источник инфекции – человек.
Механизмы заражения: воздушно-капельный, контактный (в том числе и половой), параэнтеральный, трансплацентарный.
Вирус имеет выраженный тропизм к тканям слюнных желез (при локализованной форме он обнаруживается только в тканях слюнных желез).
ЦМВ поражает клетки разных органов и систем, длительно персистирует в организме и периодически выделяется во внешнюю среду.
Инфекционный процесс: бессимптомная латентная инфекция, либо клинически манифестная (локализованная или генерализованная формы).
Место персистенции – моноциты и макрофаги.
Постнатальное заражение почти всегда бессимптомно.
Инфекционный мононуклеоз, гепатит, пневмония.
ЦМВ – один из главных возбудителей оппуртонистических инфекций: при ослаблении Т-клеточного иммунитета (ВИЧ, у пациентов, принимающих иммунодепрессанты и цитостатики).
Патология плода и новорожденных при ЦМВ-инфекции
Внутриутробное инфицирование обычно проходит незаметно. Но в 5% случаев (чаще при заражении в двух первых триместрах беременности) развивается цитомегалическая болезнь – острая форма инфекции с поражением внутренних органов.
Дефекты развития плода, гепатит и гепатоспленомегалия, тромбоцитопеническая пурпура (геморрагический синдром), гидро- и микроцефалия, хореоретинит.
Примерно в 15% случаев – латентная инфекция: новорожденные отстают в умственном развитии и теряют слух из-за поражения сенсорных центров слухового нерва.
Наибольший риск внутриутробного ЦМВ-инфицирования плода и развития тяжелых форм заболевания отмечается в тех случаях, когда беременная женщина переносит первичную ЦМВИ.
Микробиологическая диагностика
Материал: моча, кровь, вагинальный и цервикальный секрет.
Цитологический метод: обнаружение специфических клеток в осадке мочи и слюны. Крупные клетки с гиперхромным ядром, внутриядерные включения, ядро окружено светлой зоной просветления («совиный глаз»).
Вирусологический метод: выделение вируса на культуре фибробластов, идентификация – РИФ, ПЦР.
Серологический метод: РН, РНГА, ИФА, классы иммуноглобулинов. АТ к возбудителям TORCH-инфекций.
Серологические маркеры ЦМВИ
IgM к предранним белкам
IgG к предранним белкам
IgM к структурным белкам
IgG к структурным белкам
Индекс авидности IgG
Лечение и профилактика
Ганцикловир и фосканет, ингибирующие синтез вирусной ДНК.
В России зарегестрирован зарубежный препарат ЦИТОТЕКТ (иммуноглобулин человека против ЦМВ инфекции для внутривенного введения, Германия).
Вирус герпеса 6 типа
ВГЧ-6.
По разным данным от 80 до 94% обследованных имеют антитела к этому вирусу.
Вероятно участвует в развитии розеолы детской (внезапной экзантемы) или псевдокраснухи у детей раннего возраста, эритемы новорожденных и синдрома хронической усталости (СХУ).
Микробиологическая диагностика. Определение вирусной ДНК в ПЦР и накопления противовирусных АТ в ИФА.
Вирус герпеса человека 7-го типа
ВГЧ-7.
Вирус распространен повсеместно, но неравномерно.
ВГЧ-7 является Т-лимфотропным вирусом, обладающем способностью инфицировать CD4 и CD8 лимфоциты и незрелые Т-клетки.
Предполагается связь между вирусом и СХУ и ВЭ у детей.
Вирус герпеса человека 8-го типа
ВГЧ-8.
В 1995 году из биоптата у пациента с саркомой Капоши были выделены вирусоподобные частицы, содержащие ДНК с элементами гомологии с ВЭБ.
Источник
Вирус герпеса размножается во многих различных тканевых культуральных системах, в монослоях эпителиальных клеток почек кролика, обезьяны, амниона человека, куриного эмбриона. Он также размножается в клетках Hela и фибробластах куриного эмбриона и человека. Могут быть использованы и культуры роговицы кролика. Бляшки развиваются в монослоях куриного эмбриона, амниона человека и клеток Hela.
Цитопатогенное действие может проявляться на 2-3 день, но в зависимости от дозы вирус может обнаруживаться и после заражения через 8 ч, когда отдельные клетки начинают округляться и появляются гигантские клетки, содержащие 100 ядрышек. В этот период можно видеть внутриядерные включения. Мы отмечаем три основных проявления ЦПД: пролиферацию и увеличение клеток, округление клеток без пролиферации и формирование гигантских клеток. Нами описан штамм вируса герпеса, который образовывал гигантские клетки.
В первичной культуре почки кролика ЦПД наступает после 12 ч заражения в 30-50% клеток монослоя и полностью через 2 дня.
В первичной эмбриональной культуре клеток куриного эмбриона вирус герпеса генитального происхождения образует бляшки. Визуально бляшки наблюдаются после 2-го дня и имеют размер от 2 до 3 мм. Для того чтобы они были лучше видны и подсчитаны, их можно покрасить нейтральным красным.
Считают, что самое раннее проявление вируса герпеса на клетку заключается в задержке митозов, которая наступает после заражения; через 6 ч наблюдается увеличение ДНК в ядрах. Фаза эклипса, в течение которой отсутствует инфекционность, длится около 12 часов, и вирус выделяется в среду через 15 часов.
Нами был использован МФА в клетках Hela, зараженных вирусом простого герпеса. Мы обнаружили флюоресцирующие образования различной локализации (большие и малые гранулы в ядре, грануляция и диффузная флюоресценция в цитоплазме или около ядерной мембраны). Специфический вирусный антиген обнаруживался МФА, если титр инфекционного вируса в клетках достигал 102’5 1О3’°ТСД5О/О, мл. Было изучено образование инфекционного вируса и вирусного антигена на протяжении 6-15 пассажей в клетках Hela, хронически инфицированных вирусом герпеса. Хроническая инфекция поддерживалась культивированием инфицированных клеток в среде, содержащей 40% человеческой сыворотки со специфическими антигенами. Методом флюоресцирующих антител доказано наличие внутриклеточного вируса и вирусного антигена в инфицированных клетках. Внеклеточный вирус в культуральной жидкости не обнаруживался.
В противоположность активной вирусной инфекции вирусный антиген обнаруживался в хронически инфицированных клетках даже при очень низких титрах внутриклеточного вируса.
P. Sandra и соавторы была показана различная адсорбционная способность клонированных штаммов вируса герпеса, размножающихся (ch+) и не размножающихся (ch ) в клетках куриного эмбриона (КЭ). При одинаковой множественности заражения (100 БОЕ) через 15 мин адсорбировалось 36% ch+ вируса и 50% ch , через 2ч — соответственно 67 и 90%.
Образование вирусных антигенов обоих вирусов было одинаковым в клетках почки кролика, однако в клетках КЭ ch+ вирус образовывал антигены в 8 раз больше. Различий в локализации антигенов, по данным иммунофлюоресценции, не обнаружено.
Многими авторами была изучена чувствительность клеток WI-38, первичных эмбриональных фибробластов, почки эмбриона человека, а также Нер-2 к вирусу герпеса. После однократного заражения культуры поддерживали в течение длительного срока. Через 3 недели только в клетках WI-38 наблюдался ЦПД. Чувствительность этих клеток к вирусу увеличивалась после их обработки диэтиламино-этилдекстраном. В инфицированных клетках обнаруживался комплементсвязывающий антиген.
Кроме того, заражали вирусом простого герпеса ретиналь-ные культуры новорожденных кроликов. Как показали исследования, этот вирус вызывает характерные ядерные изменения в ретинальных культурах и деструкцию нейронов, что может быть использовано при селекции клеточной чувствительности и характеристики биологической особенности вируса герпеса.
Некоторые штаммы вируса герпеса вызывают острую лити-ческую инфекцию культур ткани, а другие размножаются на тех же культурах ткани, формируя синцитий. С понижением окружающей температуры с 37°С до 33°С удается трансформировать острую герпетическую инфекцию в хронический процесс.
Культивирование вируса герпеса можно проводить также на куриных эмбрионах, заражая их в амниотическую полость, желточный мешок, на хорионаллантоисную оболочку или непосредственно в сам эмбрион.
При заражении на хорионаллантоисную оболочку можно наблюдать микроскопические изменения, представляющие собой очаги пролиферации с центральными некротическими участками.
Для куриных эмбрионов первые пассажи вируса герпеса чаще всего не вызывают специфической гибели, а последующие являются летальными для куриного зародыша через 3-5 дней после заражения.
Специфические внутриядерные вирусные включения можно обнаружить во всех органах инфицированных куриных эмбрионов, что считается патогномоничным для этой инфекции.
J. Parker и соавторы, А.Ф. Пухнер наблюдали, что штаммы вируса герпеса генитального происхождения, изолированные от больных с герпетическими поражениями гениталий, продуцировали на хорионаллантоисной оболочке развивающихся куриных эмбрионов большие атипичные некротические поражения. Штаммы вируса герпеса, изолированные ими от пациентов с герпетическими поражениями экстрагенитальной локализации, продуцировали через 24 ч на хорионаллантоисной оболочке куриных эмбрионов классические мелкие (1-2 мм) некротические участки поражения. Это может быть использовано для дифференциации штаммов вируса герпеса генитального и экстрагенитального происхождения, так как по морфологическим изменениям в культуре ткани и по ЦПД это сделать не удается .
После первичных цитологических находок в соскобах клеток, взятых у лиц с герпесом, вирус может быть изолирован в 43% случаев, при повторных цитологических находках — в 18% случаев, т.е. как в первые 10 дней после начальных цитологических изменений, так и после 20 дней заболевания герпесом.
W. Ashe и соавторы сообщили об изоляции вируса герпеса симплекс из слюнной железы людей.
У куриных эмбрионов, зараженных на хорионаллантоисную оболочку вирусом герпеса, вирусемия наблюдается в первые сутки после заражения и держится на высоком уровне вплоть до гибели куриного зародыша. Было показано, что при острой герпетической инфекции у куриных эмбрионов во время вирусе-мии вирус связан с эритроцитами с разной интенсивностью.
По данным P.M. Бикбулатова (1986), наибольшей цитомор-фологической чувствительностью к заражению ВПГ обладали из первичных культур ФЭЧ, ПЭЧ, из перевиваемых Vero, СОЦ.
Это может иметь определенное значение и для цитодиагностики ВПГ с использованием клеточных культур.
Им установлено, что ВПГ-инфекция клеточных культур сопровождается выраженными изменениями метаболизма клеток: активизацией окислительно-восстановительных митохондриаль-ных ферментов, увеличением энзимов белкового и углеводного обменов, выходом из клеток лизосомальных гидролитических ферментов и индукцией патологических митозов. Это позволяет думать, что с самых ранних этапов ВПГ-инфекции митохон-дриальный аппарат клетки активно реагирует на воздействие вируса и обеспечивает его энергией для проникновения и последующего биосинтеза.
В.Я. Кицаком (1984) приведено исследование этиологической и патогенетической роли ВПГ-2 в канцерогенезе. Показана трансформирующая активность вируса в культуре клеток, си-нергическое влияние персистентной герпетической инфекции на химический канцерогенез у мышей, усиление коканцероген-ного эффекта ВПГ-инфекции на химический бластогенез в условиях интоксикации организма животных, а также этиопатоге-нетическая связь герпеса гениталий с раком шейки матки человека. Им также установлена способность ВПГ-2 индуцировать трансформацию клеток хомячка, которая фенотипически проявляется в изменении совокупности функциональных морфологических свойств. Этот автор показал, что неопластическая трансформация клеток под влиянием ВПГ-2 является многоэтапным процессом и что молекулярно-генетический механизм индукции трансформации клеток связан с прямым онкогенным действием ВПГ-2.
Изоляция вируса герпеса производится на кроликах, мышах-сосунках, в культурах тканей и в куриных эмбрионах. Кроликов заражают интрацеребрально или в роговицу глаза. Мышей-сосунков заражают интрацеребральным путем, а куриные эмбрионы — в хорионаллантоисную оболочку. Наряду с этим производят инокуляцию вируса герпеса в культуры ткани, чувствительные к этой инфекции, включая ткань роговицы и клетки почки кролика, амнион человека или клетки Hela. Вирус герпеса вызывает в них цитопатические изменения — появление гигантских клеток с внутриядерными включениями. В противоположность этому вирусы герпеса Zoster и ветрянки не способны вызывать инфекционный процесс у белых мышей-сосунков, кроликов, на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона и в клетках роговицы кролика.
Частота выделения вируса герпеса из гениталий больных зависит в определенной степени от использования различных методов изоляции вируса и колебалась, по нашим данным, от 70 до 95,4% случаев.
Для идентификации вируса герпеса применяется ряд серологических реакций. Наиболее широко используются реакции нейтрализации и реакция связывания комплемента (РСК). Кровь берут от пациентов в первые дни заболевания, дают свернуться и отделяют сыворотку. Повторно кровь для получения сыворотки берут через 2-3 нед, т.е. в период выздоровления. Если нельзя сразу исследовать сыворотку, то ее хранят в холодильнике при температуре -20°С.
Koзлoвa В.И., Пyxнep А.Ф.
Герпетическая инфекция, подробнее…
Дополнительная информация:
- Лабораторная диагностика герпеса
- Реакция нейтрализации вируса герпеса на белых мышах
- Вся информация по этому вопросу
Источник